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支原體10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品 (貨號(hào)：102-0002)
用途：
德國(guó)Minerva Biolabs公司原裝進(jìn)口的支原體10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品，用于以核酸為基礎(chǔ)的支原體檢測(cè)的功能驗(yàn)證和靈敏度驗(yàn)證。
試驗(yàn)的說(shuō)明：
根據(jù)《歐洲藥典》第2.6.7章，對(duì)于以核酸為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法如PCR，為了取代傳統(tǒng)培養(yǎng)的方法，支原體檢測(cè)的靈敏度需要達(dá)到為每ml樣本10個(gè)集落形成單位（CFU）。對(duì)于任何特定的樣本基質(zhì)，這項(xiàng)靈敏度的驗(yàn)證需要作為功能試驗(yàn)的一部分加以完成。
對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)安全性的法規(guī)，存在活的支原體是不可接受的。我們10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品的支原體不是活支原體，可使驗(yàn)證試驗(yàn)安全而可靠的進(jìn)行。
正如《歐洲藥典》第2.6.7章所描述的那樣，支原體先在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，隨后稀釋并接種在Hayflick和Frey培養(yǎng)基中，用于確定CFU集落數(shù)。在生長(zhǎng)的早期對(duì)數(shù)期進(jìn)行支原體的收集，以保證活支原體對(duì)死支原體的高比例，以及基因組單位對(duì)CFU的低比例。所有菌株均來(lái)自英國(guó)的菌種保藏中心NCTC，并且傳代次數(shù)很少。相應(yīng)的NCTC編號(hào)和ATCC編號(hào)列在試劑表中。
試驗(yàn)的原理：
每管包含10CFU不可逆滅活的支原體。因而支原體不可用于培養(yǎng)法。簡(jiǎn)要而言，根據(jù)歐洲藥典第2.6.7章，一個(gè)樣本是通過(guò)添加待測(cè)樣品的基質(zhì)而完成制備。
樣品在做PCR擴(kuò)增前，需要先做DNA抽提。正如幾個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)所示，為了達(dá)到最高靈敏度，DNA抽提是必要的。使用我們的支原體DNA提取試劑盒（Venor?GeM Sample Preparation Kit）可以輕松完成DNA抽提。提取的DNA即可直接用于PCR。要符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)，PCR檢測(cè)應(yīng)顯示為陽(yáng)性擴(kuò)增。
請(qǐng)注意：我們的10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品是依據(jù)集落形成單位進(jìn)行的標(biāo)定，而非依據(jù)基因組拷貝數(shù)，正如歐洲藥典第2.6.7章也不包含有關(guān)DNA含量的詳細(xì)信息。我們沒(méi)有提供基因組單位對(duì)CFU的比例，因?yàn)樵摫壤诓煌伍g可能有變化。
試劑表：
試劑盒組分
數(shù)量
NCTC編號(hào)
ATCC編號(hào)
貨號(hào)
精氨酸支原體
3管
10129
23838
102-1003
口腔支原體
10112
23714
102-2003
雞敗血支原體
10115
19610
102-3003
肺炎支原體
10119
15531
102-4003
關(guān)節(jié)液支原體
10124
25204
102-5003
發(fā)酵支原體
10117
19989
102-6003
豬鼻支原體
10130
17981
102-7003
萊氏無(wú)膽甾原體
10116
23206
102-8003
螺原體
10164
27556
102-9003
陰性對(duì)照
2管
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10CFU支原體套裝（貨號(hào)102-0003）包含有歐洲藥典第2.6.7章列出的各種支原體2管（總共18管）和陰性對(duì)照2管。
支原體直接用培養(yǎng)基稀釋?zhuān)ＷC每個(gè)支原體細(xì)胞的完整性，隨后用10mM Tris緩沖液（pH 8.0）稀釋10倍，避免培養(yǎng)基對(duì)PCR試驗(yàn)的不良效應(yīng)。所有樣品菌均為凍干形式，以保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
支原體在凍干前進(jìn)行了滅活。支原體的滅活經(jīng)Hayflick和Frey培養(yǎng)基在37℃（螺原體在30℃培養(yǎng)）培養(yǎng)23天所證實(shí)。采用Venor? GeM qEP Mycoplasma Detection Kit進(jìn)行定量PCR，以監(jiān)測(cè)生長(zhǎng)狀況。
未開(kāi)封產(chǎn)品的效期在包裝標(biāo)簽上。試劑盒組分必須在2～8℃保存，直到使用。每個(gè)批號(hào)的產(chǎn)品均可在Minerva廠(chǎng)家網(wǎng)站下載質(zhì)控證明：www.minerva-biolabs.com
需用戶(hù)自己提供的耗材和儀器
試劑盒包含的試劑，用于制備有支原體顆粒摻入的樣品。任何其他普通實(shí)驗(yàn)室儀器和消耗品如PCR試劑，由用戶(hù)自己提供。
注意事項(xiàng)
10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品只適合體外，由有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室人員使用。試劑盒不包含有害物質(zhì)。殘留物可以根據(jù)當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)的規(guī)定處理?xiàng)壍簟?br>
試驗(yàn)步驟
所有試劑盒樣品在試驗(yàn)開(kāi)始前，均應(yīng)放置片刻，達(dá)到與室溫平衡。
1. 管離心，以收集凍干粉至管底。
2. 每個(gè)管中添加1ml你的樣品。
3. 室溫孵育5分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒，再離心10秒。
5. 使用適當(dāng)?shù)捏w積用于DNA抽提。我們推薦使用我們的支原體DNA提取試劑盒（即Venor?GeM Sample Preparation Kit）。
6. 使用適當(dāng)體積的提好的DNA用于PCR擴(kuò)增。
陰性對(duì)照樣品的制備，和支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品的制備一樣，但它不包含任何支原體顆粒。陰性對(duì)照必須用同樣的樣品基質(zhì)來(lái)溶解，并且采用適當(dāng)數(shù)量的重復(fù)管并行操作，也驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果的合理性。
附加說(shuō)明
順利使用該產(chǎn)品需要對(duì)說(shuō)明書(shū)充分理解。提供的試劑不能和其他批次的試劑混合，但可以作為一個(gè)整體使用。試劑必須在效期內(nèi)使用。任何實(shí)驗(yàn)步驟的偏離都可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。
附錄
產(chǎn)品的有限擔(dān)保
本保證限定了我們對(duì)本產(chǎn)品更換的責(zé)任。即不提供任何明確的或默示的保證，包括無(wú)任何限制的、對(duì)適銷(xiāo)性或適合某一特定用途的隱含保證。對(duì)于使用中產(chǎn)生的任何直接、間接、隨之帶來(lái)的或偶然出現(xiàn)的損壞，對(duì)于使用后的結(jié)果或本產(chǎn)品的無(wú)法使用，Minerva Biolabs不應(yīng)承擔(dān)任何責(zé)任。
