細(xì)胞(尤其神經(jīng)元、心肌細(xì)胞)活化時(shí),胞內(nèi)鈣離子濃度會(huì)快速瞬時(shí)升高,鈣離子可作為細(xì)胞興奮、信號傳導(dǎo)的天然標(biāo)志物;鈣成像利用這一特性,通過熒光探針捕捉鈣信號變化,將細(xì)胞電活動(dòng) /...
細(xì)胞(尤其神經(jīng)元、心肌細(xì)胞)活化時(shí),胞內(nèi)鈣離子濃度會(huì)快速瞬時(shí)升高,鈣離子可作為細(xì)胞興奮、信號傳導(dǎo)的天然標(biāo)志物;鈣成像利用這一特性,通過熒光探針捕捉鈣信號變化,將細(xì)胞電活動(dòng) /...
CRISPR/Cas13 系統(tǒng)是目前發(fā)現(xiàn)的能夠靶向 RNA 的 CRISPR 系統(tǒng),該系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)擴(kuò)展了 CRISPR 系統(tǒng)在病毒干擾方面的應(yīng)用。新發(fā)現(xiàn)的 Cas13 蛋白第四...
在分子生物學(xué)與基因研究的浪潮中,RNA 干擾(RNAi)技術(shù)憑借其精準(zhǔn)的基因調(diào)控能力,成為科研領(lǐng)域的重要工具,而siRNA(小干擾 RNA) 作為 RNAi 通路的核心執(zhí)行者...
RNA 作為一種重要的生物大分子,參與細(xì)胞生命代謝的整個(gè)過程,其代謝異常會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。 與相對穩(wěn)定遺傳的 DNA 不同,RNA 引起的改變是暫時(shí)的、非永久性的,但是 ...
dCas9(dead Cas9)是 Cas9 蛋白的突 變 體, 即 因 Cas9 的 RuvC1 和 HNH 兩個(gè)核酸酶活性區(qū)域同時(shí)發(fā)生突變產(chǎn)生,其剪切酶活性喪失,只保留了...
對于轉(zhuǎn)染困難的細(xì)胞,科研工作者通常會(huì)選擇病毒來導(dǎo)入目的基因。目前,腺病毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒是常用的病毒載體工具。那么如何選擇適合您實(shí)驗(yàn)體系的病毒工具,請參考下面3種病毒工具...
腺病毒載體能感染分裂和非分裂細(xì)胞。它適用于體內(nèi)和體外基因傳遞,轉(zhuǎn)染效率高,對外源基因瞬時(shí)表達(dá)量高。但相對于其他病毒載體系統(tǒng),腺病毒載體在靶細(xì)胞中具有相對較高的免疫原性。您應(yīng)考...
肝臟對全身應(yīng)用AAV有較高的親合性,AAV在肝臟中的注射方式分為直接傳送和外周傳送兩種(下表所示),其中尾靜脈注射和腹腔注射是目前應(yīng)用比較廣泛的注射方式,操作者也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)?..
肝內(nèi)注射 AAV 是實(shí)現(xiàn)肝臟局部高效轉(zhuǎn)導(dǎo)的經(jīng)典方式,相比尾靜脈注射,能大幅降低 AAV 使用劑量、減少全身擴(kuò)散,特別適合肝臟基因功能研究、肝病模型等課題。 本文詳述AAV 肝...
做基因功能、疫苗、溶瘤病毒、細(xì)胞標(biāo)記實(shí)驗(yàn),腺病毒是真的好用 —— 表達(dá)強(qiáng)、快、不整合、滴度高。但很多人第一次包裝腺病毒都會(huì)踩坑:不長空斑、不病變、收不到毒、污染、滴度低。這篇...
很多做科研、基因治療、疫苗研究的人,都繞不開腺病毒載體。但很多人只知道它好用,卻不清楚:腺病毒到底是怎么一步步鉆進(jìn)細(xì)胞、完成感染的? 1. 吸附:先 “抓住” 細(xì)胞 腺病毒要...
腺病毒 (Adenovirus,Adv) 是一種無包膜的 DNA 病毒,其復(fù)制不依賴于宿主細(xì)胞的分裂。腺病毒擁有近50 個(gè)血清型,大多數(shù)腺病毒載體是基于血清型 2 和血清型 ...
腦定位注射,相比其他注射方式靶向性強(qiáng),注射病毒體積小,但是侵入性也強(qiáng),且對操作者具有很高的要求。在立體定位手術(shù)時(shí),顱骨上常用的注射參照點(diǎn)是前囟, 也就是中矢狀冠狀縫的交叉點(diǎn)(...
皮下注射 1.使用戊巴比妥鈉麻醉小鼠后,用剃毛器將小鼠腰背部的毛剃掉,用 70% 的酒精擦拭; 2. 抓住背部中線褶皺處皮膚,輕輕向上提拉,形成“帳篷”形狀,以最大限度的減少...
1. 將新生小鼠放在預(yù)冷的紙巾上 30-60s, 進(jìn)行麻醉 ; 或: 在紙巾上滴加 0.5 mL 異氟烷,并將紙巾放入 50 mL 的錐形管中,擰緊瓶蓋,靜置 1 min。將...
膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是最致命的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤,其腫瘤微環(huán)境(TME)具有強(qiáng)免疫抑制性,缺乏有效腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTLs),現(xiàn)有免疫治療響應(yīng)率...
對于成年小鼠來說,通過尾靜脈注射是比較簡單的注射方式,但如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型為新生小鼠,那么面靜脈可能是更加合適的注射位點(diǎn)。 1. 將新生小鼠放在預(yù)冷的紙巾上 30-60s, 進(jìn)...
1. 將小鼠放在固定器中,使尾部充分暴露; 2. 在小鼠尾部噴灑 70% 異丙醇; 3. 將小鼠尾巴拉直,使尾巴兩側(cè)的靜脈清晰可見; 4. 將針頭盡可能遠(yuǎn)的插入尾部側(cè)面靜脈;...
特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一種進(jìn)行性、致死性肺病,治療選擇有限,預(yù)后差,巨噬細(xì)胞向促纖維化M2表型極化是其關(guān)鍵病理過程。糖尿病是IPF的危險(xiǎn)因素,而醛糖還原酶(AR)抑制劑已...
細(xì)胞黏附分子(CAM)在建立和維持突觸連接中至關(guān)重要。最新證據(jù)表明,突觸間隙內(nèi)的一些分泌因子,包括C1q樣蛋白,通過連接兩側(cè)的CAM在突觸前和突觸后起著重要的橋接作用。然而,...