? What？之前不了解這個(gè)東西，沒(méi)有接觸過(guò)基因重組小鼠實(shí)驗(yàn)。偶然發(fā)現(xiàn)一篇文章PNAS2014年的（默默感謝那篇文章全體作者），里面有涉及到這個(gè)基因重組技術(shù)。今天做了文獻(xiàn)發(fā)表，就在發(fā)表的前一天，跟朋友那才了解，獲悉Cre-Lox 在動(dòng)物試驗(yàn)里是很常用的技術(shù)。
? 整理的內(nèi)容就是目前自己理解的，哪里不對(duì)請(qǐng)糾正，含淚萬(wàn)分感謝。也希望給不了解它的人提供一些有幫助的信息。
? Cre是最早微生物里發(fā)現(xiàn)的基因，它可以編碼Cre recombinase一種基因重組酶。Cre重組酶可以識(shí)別特異性序列，這個(gè)序列被稱作Loxp序列，有34bp長(zhǎng)(建議維基百科看詳細(xì)介紹，此處重點(diǎn))。Cre重組酶會(huì)識(shí)別到Loxp序列并且修改Loxp之前的基因／序列（取決于Loxp的方向，建議維基百科看詳細(xì)介紹，此處重點(diǎn)）。經(jīng)常用這個(gè)技術(shù)來(lái)knockout gene。一般這個(gè)基因重組技術(shù)會(huì)用到雜交，打個(gè)比方，父親老鼠里的某特異性基因A（我們感興趣的基因，比如細(xì)胞態(tài)／組織特異表達(dá)的基因）里，在胚胎時(shí)期被修改并插入Cre基因序列，這樣以來(lái)它所有細(xì)胞的基因組里這個(gè)特異基因中都帶有了Cre基因序列，Cre基因的表達(dá)和翻譯受到該特異性基因A的啟動(dòng)子影響，也就是說(shuō)如果一個(gè)細(xì)胞里A基因被激活／可以轉(zhuǎn)錄的，那么Cre基因也同樣被激活／可以轉(zhuǎn)錄的。但是，還沒(méi)完，Cre轉(zhuǎn)錄之后目的是編碼蛋白啊，一種叫做Cre重組酶的東西，還需要Loxp啊。通常Loxp會(huì)在母親鼠里面，目的是切掉兩個(gè)Loxp中間的序列或者基因，起到一定的生物學(xué)作用。經(jīng)常被用到的也是我看的這篇文章提到的，胚胎細(xì)胞開(kāi)始在母親鼠的Rosa26區(qū)域／基因的兩個(gè)外顯子之間轉(zhuǎn)入Loxp序列（據(jù)說(shuō)都這么干），Loxp中間是一個(gè)STOP基因，這段序列可以阻止下游的基因被轉(zhuǎn)錄，類似轉(zhuǎn)錄停止位點(diǎn)，還沒(méi)完，還是在Rosa26基因的兩個(gè)外顯子之間緊隨Loxp-stop-Loxp之后，還有一些reporter gene被加入里，報(bào)告基因一般包括LacZ，GFP，YFP，etc （如果不了解這些報(bào)告基因，建議維基百科看詳細(xì)介紹，此處重點(diǎn)）。所以說(shuō)在通常情況下母親鼠里全體細(xì)胞里Rosa26基因都是轉(zhuǎn)錄到STOP序列后停止了。還有一點(diǎn)要提的就是，Rosa26這個(gè)基因在老鼠里幾乎是所有細(xì)胞／組織都會(huì)轉(zhuǎn)錄的（啟動(dòng)子是工作的）但是這個(gè)基因沒(méi)什么大用，所以大家在這里面各種修改添加都不會(huì)影響到小鼠的健康問(wèn)題。那么，現(xiàn)在有了A基因-Cre父親鼠和Rosa26-Loxp-reporter母親鼠，接下來(lái)就是讓他們別閑著造小鼠。他們的孩子就一般標(biāo)記成A-Cre::RLacZ/ A-Cre::RGFP/ A-Cre::RYFP/ etc，“::”代表的意思是？沒(méi)錯(cuò)“雜交”，所以這個(gè)雜交小鼠一般是研究的目的樣品。 因?yàn)樵谶@一代出生的小鼠身上同時(shí)包含了兩處基因被修飾的地方，一個(gè)是A基因，一個(gè)是Rosa26區(qū)域／基因。目的基因A一般應(yīng)該是特異性的，只在某些細(xì)胞或者某些組織特異表達(dá)的（一些marker基因），那么在這些A基因表達(dá)的細(xì)胞／組織里Cre也跟著表達(dá)了，因?yàn)镃re嚴(yán)格受到A基因的啟動(dòng)子調(diào)控，隨后Cre的mRNA編碼成Cre重組酶出去工作了（細(xì)胞主要的功能體現(xiàn)者是蛋白質(zhì)）。隨著Cre重組酶的表達(dá)接下來(lái)會(huì)切斷Rosa26兩個(gè)外顯子內(nèi)，兩個(gè)Loxp序列之間的STOP基因，所以呢，沒(méi)錯(cuò)后面的Repoter gene開(kāi)始轉(zhuǎn)錄了，大便通暢的趕腳。所以我們可以通過(guò)檢測(cè)Repoter基因產(chǎn)物可以間接的檢測(cè)到這些細(xì)胞，比如組織染色，in situ hybridization (ISH）染色，熒光檢測(cè)，etc。這時(shí)候可能會(huì)問(wèn)到，那直接在特異基因后添加個(gè)repoter gene不就可以輕松搞定了嗎？何必這么麻煩，弄來(lái)弄去還需要嘿咻嘿咻。重點(diǎn)在這里，不論是加在A基因后的Cre也好，或是直接加個(gè)repoter gene也好，他們都會(huì)直接／即時(shí)的受到A基因的活性調(diào)節(jié)，非常同步；基因重組小鼠的情況則不然，Cre重組酶表達(dá)后會(huì)不可逆轉(zhuǎn)的切掉該細(xì)胞的STOP基因，repoter gene會(huì)持續(xù)表達(dá)下去，也就是即使后來(lái)Cre基因不轉(zhuǎn)錄了，你依然會(huì)看到repoter gene在該細(xì)胞表達(dá)，頓時(shí)感覺(jué)想出這個(gè)技術(shù)的人太牛了，所以這個(gè)基因重組技術(shù)通?？梢员挥糜谧粉櫩睖y(cè)一些細(xì)胞態(tài)轉(zhuǎn)化分化，“即使你變了我也認(rèn)得你”。
? 以上就是總結(jié)的關(guān)于Cre-Lox基因重組老鼠的技術(shù)，當(dāng)然好多信息沒(méi)有被提到，粗略淺顯就是希望通俗易懂。也是為了轉(zhuǎn)天自己忘了，再看看能提個(gè)醒！JS里第一個(gè)生物學(xué)知識(shí)筆記，還會(huì)繼續(xù)堅(jiān)持。
感謝提到的朋友：LYP 和 WQL。
參考：https://www.biomart.cn/experiment/430/431/439/2285703.htm
