產(chǎn)品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的FBW7抗體（貨號A301-721A）是一款針對人源F-box/WD重復(fù)域蛋白7（FBW7）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人源FBW7蛋白，適用于免疫沉淀及免疫組織化學(xué)檢測，為SCF E3泛素連接酶復(fù)合物調(diào)控及腫瘤抑制機(jī)制研究提供可靠工具。
核心規(guī)格參數(shù)
參數(shù)?詳細(xì)信息
靶標(biāo)?FBW7（F-box/WD重復(fù)域蛋白7）
反應(yīng)性?人類
宿主?兔
克隆性?多克隆
免疫原?第50–100位氨基酸區(qū)域
抗體形式?完整IgG
同型?IgG
偶聯(lián)物?未偶聯(lián)
純度?抗原親和純化
抗原種屬?人類
濃度?1000 μg/ml（1 mg/ml）
緩沖液?Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉
儲存條件?2–8 °C
保質(zhì)期?到貨后1年
突出優(yōu)勢：該抗體濃度為1000 μg/ml，提供了充足的工作儲備，適合高通量IHC篩查及多次IP實(shí)驗(yàn)。
免疫原與特異性驗(yàn)證
A301-721A抗體采用固相載體上固定的FBW7特異性表位進(jìn)行親和純化。該抗體識別的表位位于人FBW7蛋白的第50至100位氨基酸之間（參考編號NP_361014.1，GeneID 55294）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。
特異性驗(yàn)證要點(diǎn)：
免疫原區(qū)域位于蛋白N端F-box結(jié)構(gòu)域鄰近區(qū)域（50–100 aa），該區(qū)域在FBW7亞型中保守，但與其它F-box蛋白（如FBXW4、FBXW5）同源性較低，有助于獲得特異性識別
經(jīng)抗原親和純化，顯著降低非特異性交叉反應(yīng)
建議使用FBW7敲除細(xì)胞裂解液或敲低樣本作為IHC/IP陰性對照
應(yīng)用方法與推薦工作濃度
免疫組織化學(xué)（IHC）
推薦稀釋范圍：1:1,000 – 1:5,000（超寬范圍，適應(yīng)不同組織類型）
抗原修復(fù)條件：
對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)
修復(fù)方法：微波或高壓鍋加熱至沸騰，維持10–20分鐘，自然冷卻至室溫
染色步驟建議：
1. 脫蠟、水化后，使用3% H?O?封閉內(nèi)源性過氧化物酶（10–15分鐘）
2. 熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液）
3. 室溫冷卻，正常山羊或兔血清封閉30分鐘
4. 一抗4°C孵育過夜（推薦起始稀釋度1:2000）
5. 匹配的HRP標(biāo)記二抗室溫孵育30–60分鐘
6. DAB顯色，蘇木精復(fù)染，封片觀察
組織類型參考：FBW7在多種正常組織中表達(dá)，包括睪丸、卵巢、腦、乳腺等；在多種腫瘤組織中可能出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)或突變。
免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解物
操作注意事項(xiàng)：
裂解緩沖液推薦使用非變性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5–1% NP-40的Tris緩沖液，pH 7.4），以維持FBW7與SCF復(fù)合物（Skp1、Cullin1、Rbx1）的相互作用
必須添加蛋白酶抑制劑（PMSF、蛋白酶抑制劑混合物）保護(hù)FBW7免于降解
抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時(shí)至過夜
使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復(fù)合物
洗脫后建議進(jìn)行WB檢測，務(wù)必使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景
> 關(guān)鍵提示：FBW7的分子量約為70–80 kDa，與IgG重鏈（約55 kDa）位置不同，但仍建議使用輕鏈特異性二抗以獲得最干凈的背景，避免重鏈信號干擾其他共沉淀蛋白的檢測。
復(fù)合物共沉淀：FBW7作為SCF E3連接酶的F-box蛋白，可識別多個(gè)底物（如Cyclin E、Notch ICD、c-Myc、c-Jun等）。通過IP-FBW7，可檢測SCF核心組分（Skp1、Cullin1）的結(jié)合，或驗(yàn)證底物在特定條件下的泛素化依賴性降解。
免疫印跡（WB）備注
雖然主規(guī)格中Applications未直接列出WB，但產(chǎn)品說明中包含了免疫沉淀后WB檢測的二抗方案。用戶可自行驗(yàn)證該抗體在WB中的適用性。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，F(xiàn)BW7多克隆抗體通?？捎糜赪B，推薦起始稀釋度為1:500–1:2000，并使用5% Milk-TBST封閉。建議使用陽性對照（如HeLa、HEK293裂解液）進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。
靶點(diǎn)生物學(xué)背景：FBW7
FBW7（F-box/WD repeat-containing protein 7），也稱為FBXW7、hCdc4或Archipelago，是F-box蛋白家族的成員之一。F-box基序最早在Cyclin F中發(fā)現(xiàn)，負(fù)責(zé)介導(dǎo)與Skp1的相互作用，從而形成SCF（Skp1-Cullin1-F-box）E3泛素連接酶復(fù)合物。
核心功能：
1. SCF E3連接酶的底物識別亞基：FBW7通過其WD40重復(fù)域識別并結(jié)合具有磷酸化降解基序的底物蛋白，將其招募至SCF復(fù)合物進(jìn)行泛素化，最終被26S蛋白酶體降解。
2. 關(guān)鍵底物及功能：
Cyclin E：FBW7介導(dǎo)Cyclin E的降解，調(diào)控細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換。FBW7失活導(dǎo)致Cyclin E累積，引起基因組不穩(wěn)定。
Notch胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（NICD）：FBW7促進(jìn)NICD的降解，從而負(fù)調(diào)控Notch信號通路，抑制細(xì)胞增殖和干細(xì)胞維持。
c-Myc、c-Jun、mTOR、Mcl1：FBW7還調(diào)控多種癌蛋白和抗凋亡因子的穩(wěn)定性，發(fā)揮廣泛的腫瘤抑制作用。
3. 腫瘤抑制：FBW7被認(rèn)為是重要的腫瘤抑制因子，在多種人類癌癥（如結(jié)直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病）中頻繁發(fā)生突變或表達(dá)下調(diào)。缺陷的FBW7導(dǎo)致其底物積累，促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展。
分子特征：
分子量：約70–80 kDa（存在多種剪接變體）
結(jié)構(gòu)域：N端F-box結(jié)構(gòu)域（介導(dǎo)與Skp1結(jié)合）；C端WD40重復(fù)域（介導(dǎo)底物識別）
調(diào)控機(jī)制：FBW7本身受磷酸化、自身泛素化及轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控。其腫瘤抑制功能與p53、AKT等多種信號通路交叉對話。
儲存與穩(wěn)定性指南
儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復(fù)凍融會導(dǎo)致蛋白聚集及活性下降。
防腐劑：0.09%疊氮化鈉，可抑制微生物生長。若用于活細(xì)胞或某些功能實(shí)驗(yàn)，需通過透析去除。
緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，提供穩(wěn)定的pH環(huán)境。
有效期：自到貨之日起1年。建議在瓶身標(biāo)注收到日期，分裝成小份儲存于2–8°C以降低反復(fù)開管風(fēng)險(xiǎn)。
