最近因為新冠肺，遲遲不能上班，在家閑著想著也要學習，就查找了和工作相關的-學些構(gòu)建質(zhì)粒，那么首先需要學習如何看質(zhì)粒圖，下面是這兩天學習到的，總結(jié)的記錄一下：

1. 復制起始位點Ori，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒），Ori的箭頭指復制方向，其他元件標注的箭頭多指轉(zhuǎn)錄方向（正向）。

2.再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記：

Ampr：水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。

tetr ：可以阻止四環(huán)素進入細胞。

camr：生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性。

neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。

hygr：使潮霉素β失活。

3. 看多克隆位點（MCS）：它具有多個限制內(nèi)切酶的單一切點（質(zhì)粒上只能有該內(nèi)切酶的唯一酶切序列，不然就一刀好幾段了），便于咱們要研究的基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便于篩選，最常見的是β-半乳糖苷酶的藍白斑篩選系統(tǒng)。

4.再看外源DNA插入片段大?。嘿|(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。

5.是否含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子（promoter）－核糖體結(jié)合位點（RBS）－轉(zhuǎn)錄終止信號（AATAAA同時是poly A）。這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調(diào)控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩。

6.看報告基因：主要是為了能迅速檢查功能基因是否表達的陽性判斷，表達成功的蛋白在小鼠體內(nèi)分布位置。

7.看質(zhì)粒圖譜上的箭頭：它代表DNA兩條鏈（正義鏈和反義鏈），即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。

上面這些只是表面，要想自己完全會構(gòu)質(zhì)粒的話還需要加深學習，問專業(yè)人士，接下來幾天加油學習。