一、產(chǎn)品概述
MOF（又稱MYST1或KAT8）是MYST家族組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的核心成員，特異性催化組蛋白H4第16位賴氨酸（H4K16）的乙?；揎?，并在DNA損傷應答中與ATM激酶相互作用。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人MOF蛋白N端區(qū)域（第1至50位氨基酸）的兔多克隆抗體（貨號：A300-992A）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以未標記完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測，反應性涵蓋人及小鼠樣本。
二、核心規(guī)格參數(shù)
參數(shù)?| 詳細信息
靶標?| MOF / MYST1 / KAT8
反應性?| 人，小鼠
應用?| IHC， IP， WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第1至50位氨基酸
亞型?| IgG
標記?| 未偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
抗原物種?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
儲存溫度?| 2 – 8 °C
有效期?| 自收貨之日起1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉
三、免疫原與表位定位
本抗體的免疫原對應人MOF/MYST1蛋白（UniProt ID: Q9H7Z6）第1至50位氨基酸之間的N端區(qū)域。參考序列登錄號為BAB13924.1，對應GeneID 84148（基因符號KAT8）。該N端區(qū)域在不同物種中相對保守，且不同于MYST家族其他成員（如TIP60、MOZ）的C端催化結(jié)構(gòu)域，因此本抗體能夠特異識別MOF全長蛋白，同時避免與家族內(nèi)其他乙酰轉(zhuǎn)移酶發(fā)生交叉反應。
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四、生產(chǎn)與親和純化工藝
抗體采用固相載體上固定的MOF特異性N端表位進行親和純化。具體而言，將包含上述第1-50位氨基酸的重組肽段或合成多肽偶聯(lián)至親和基質(zhì)，兔抗血清經(jīng)該親和柱層析，獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后的抗體保存在Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，并添加0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。
五、儲存與穩(wěn)定性
抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中的疊氮化鈉可能會抑制過氧化物酶標記檢測體系，若計劃將本抗體用于HRP偶聯(lián)二抗的檢測系統(tǒng)（如WB或IHC中的信號放大），建議通過透析或脫鹽步驟去除疊氮化鈉，或選擇與疊氮化鈉兼容的檢測試劑。
六、應用指南與優(yōu)化參數(shù)
以下稀釋度和操作條件基于產(chǎn)品驗證數(shù)據(jù)提供。所有蛋白質(zhì)印跡實驗均需使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對于不同實驗類型，需注意二抗的選擇差異。
免疫組織化學（IHC）
推薦稀釋度：1:1,000 – 1:5,000
關(guān)鍵操作要點：
對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，必須進行抗原修復。
推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導抗原修復?？刹捎梦⒉t加熱至沸騰后維持10-20分鐘，或使用高壓鍋修復2-5分鐘。
修復后需自然冷卻至室溫，再用PBS洗滌，然后進行封閉和一抗孵育。
由于抗體未直接標記，需配合HRP或熒光標記的抗兔二抗進行檢測。
建議：初次使用本抗體進行IHC時，可從1:1,000稀釋度開始，根據(jù)信號強度和背景情況向上調(diào)整（最高至1:5,000）。設(shè)置已知陽性組織（如人睪丸、HeLa細胞異種移植瘤或小鼠腦組織）作為陽性對照，并省略一抗作為陰性對照。
免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白
操作流程要點：
1. 制備細胞裂解液（推薦使用非變性裂解緩沖液，如含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40緩沖液）。
2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 μg本抗體。
3. 4°C旋轉(zhuǎn)孵育過夜，確?？乖?抗體充分結(jié)合。
4. 加入蛋白A瓊脂糖或磁珠（根據(jù)抗體宿主選擇兔特異性結(jié)合介質(zhì)），繼續(xù)孵育2-4小時。
5. 洗滌沉淀復合物3-5次后，加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮沸洗脫。
6. 洗脫產(chǎn)物進行WB檢測時，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（而非識別重鏈的二抗），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）與MOF（約60 kDa）信號重疊。
重要提示：在IP后WB檢測的封閉緩沖液中，建議添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以進一步降低背景信號。
