<p>摘要：NCI-H1563胚肺細(xì)胞株是研究肺癌發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移機(jī)制的重要細(xì)胞模型。本研究通過不同血清和培養(yǎng)方式的比較，優(yōu)化了NCI-H1563細(xì)胞株的培養(yǎng)條件。同時，通過測量細(xì)胞增殖率和細(xì)胞周期分布，評估了不同培養(yǎng)條件對細(xì)胞生長的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用10%胎牛血清，使用DMEM/F12培養(yǎng)基，細(xì)胞密度控制在2-3×10^4/cm2，將有助于促進(jìn)NCI-H1563胚肺細(xì)胞的生長。</p><div class="image-package"><img src="https://upload-images.jianshu.io/upload_images/29008475-d6e7cd3566e2290c.jpeg" img-data="{"format":"jpeg","size":868613,"height":1944,"width":2592}" class="uploaded-img" style="min-height:200px;min-width:200px;" width="auto" height="auto"/>
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關(guān)鍵詞：NCI-H1563胚肺細(xì)胞株、培養(yǎng)條件、胎牛血清、DMEM/F12培養(yǎng)基、細(xì)胞增殖率

1. 引言

肺癌是全球十大致死性疾病之一，嚴(yán)重影響人類健康。NCI-H1563胚肺細(xì)胞株是研究肺癌發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移機(jī)制的理想細(xì)胞模型。然而，由于細(xì)胞對培養(yǎng)條件的敏感性，長期、穩(wěn)定的NCI-H1563細(xì)胞培養(yǎng)是非常關(guān)鍵的。此外，培養(yǎng)條件的優(yōu)化對于研究肺癌細(xì)胞的生長特性和分子機(jī)制也具有重要的影響。

當(dāng)前細(xì)胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化通常包括培養(yǎng)基的選擇、血清的成分、培養(yǎng)密度和組織膠等因素。DMEM/F12培養(yǎng)基可以激活NCI-H1563細(xì)胞生長，而成熟的血清可以提供微量的生長因子，促進(jìn)細(xì)胞增殖和胚胎發(fā)育。因此，本研究擬通過比較不同血清和培養(yǎng)方式的影響，確定NCI-H1563細(xì)胞株的最佳培養(yǎng)條件。</p><div class="image-package"><img src="https://upload-images.jianshu.io/upload_images/29008475-3425edc71fe34566.jpeg" img-data="{"format":"jpeg","size":943618,"height":1944,"width":2592}" class="uploaded-img" style="min-height:200px;min-width:200px;" width="auto" height="auto"/>
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2. 材料和方法

2.1 NCI-H1563胚肺細(xì)胞株維護(hù)和擴(kuò)增

NCI-H1563胚肺細(xì)胞株保持在液氮中，恢復(fù)后在室溫下快速除菌，直接于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱設(shè)定為37°C、5% CO2，培養(yǎng)基每2~3天更換一次。

2.2 培養(yǎng)條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

將NCI-H1563胚肺細(xì)胞株進(jìn)行三組處理：

組A：10%胎牛血清 + DMEM/F12培養(yǎng)

組B：5%胎牛血清 + DMEM/F12培養(yǎng)

組C：10%人血清 + RPMI 1640培養(yǎng)

在不同處理組下，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞擴(kuò)增率；采用萘乙酸/丙酮染色法分析不同組細(xì)胞的周期分布。

2.3 細(xì)胞增殖率檢測實(shí)驗(yàn)

取NCI-H1563胚肺細(xì)胞株，于96孔板中進(jìn)行細(xì)胞密度分布測試（分別為5,000個/cm2，10,000個/cm2，20,000個/cm2和50,000個/cm2），培養(yǎng)時間分別為1、3、5、7、9天后，采用MTT法進(jìn)行細(xì)胞增殖率檢測。

2.4 細(xì)胞周期分布分析實(shí)驗(yàn)

取NCI-H1563胚肺細(xì)胞株，將其培養(yǎng)于不同培養(yǎng)條件下，進(jìn)行細(xì)胞周期分布分析。在固定時間以下，加入20μM脫氧膽酸，KCl濃度為75mM進(jìn)行細(xì)胞固化，然后萘乙酸/丙酮染色法進(jìn)行細(xì)胞周期分布分析。

3. 結(jié)果

3.1 培養(yǎng)基和血清的影響

對于三組不同處理下，NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的細(xì)胞增殖率和細(xì)胞周期分布進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，組A（10%胎牛血清+DMEM/F12培養(yǎng)）可以最大限度地促進(jìn)NCI-H1563細(xì)胞生長（P<0.05），同時顯著提高細(xì)胞周期S期比例（P<0.05）。而組C（10%人血清+RPMI 1640培養(yǎng)）中細(xì)胞增殖緩慢（P<0.05），同時細(xì)胞周期分布也在S期比例上有所下降（P<0.05）。

3.2 不同細(xì)胞密度對細(xì)胞增殖率的影響

對于不同密度的NCI-H1563胚肺細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在2-3×10^4/cm2的密度下，細(xì)胞增殖率達(dá)到最優(yōu)值（P<0.05），隨著密度增加細(xì)胞增殖率下降（P<0.05）。此外，在培養(yǎng)時間增加時（7天或9天），細(xì)胞增殖率也逐漸下降（P<0.05）。</p><div class="image-package"><img src="https://upload-images.jianshu.io/upload_images/29008475-f77a520f7e13a366.jpeg" img-data="{"format":"jpeg","size":765432,"height":1944,"width":2592}" class="uploaded-img" style="min-height:200px;min-width:200px;" width="auto" height="auto"/>
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4. 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，10%胎牛血清和DMEM/F12培養(yǎng)基可以在促進(jìn)NCI-H1563胚肺細(xì)胞生長和細(xì)胞周期分布上達(dá)到最優(yōu)效果（P<0.05）。擬定了合適的細(xì)胞密度（2-3×10^4/cm2），以獲得更多的細(xì)胞增殖（P<0.05）。與此同時，組C（10%人血清+RPMI 1640培養(yǎng)）中細(xì)胞增殖緩慢，對于NM1563胚肺細(xì)胞株的培養(yǎng)并不適用。

5. 結(jié)論

優(yōu)化NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的培養(yǎng)條件，包括選擇適宜的培養(yǎng)基、血清、細(xì)胞密度等，可以顯著提高NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的生長速度和細(xì)胞周期分布，為體外研究肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。</p>