一、產(chǎn)品概述
BAF57（又稱SMARCE1）是SWI/SNF染色質(zhì)重塑復(fù)合物的核心亞基，在雌激素受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄共激活中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)人BAF57/SMARCE1蛋白C端區(qū)域（第361至411位氨基酸）的兔多克隆抗體（貨號(hào)：A300-810A）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以未標(biāo)記完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測，反應(yīng)性涵蓋人及小鼠樣本。
二、核心規(guī)格參數(shù)?
參數(shù)?| 詳細(xì)信息
靶標(biāo)?| BAF57 / SMARCE1
反應(yīng)性?| 人，小鼠
應(yīng)用?| IHC， IP， WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第361位至C端（全長411位）
亞型?| IgG
標(biāo)記?| 未偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
抗原物種?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
儲(chǔ)存溫度?| 2 – 8 °C
有效期?| 自收貨之日起1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉
三、免疫原與表位定位
本抗體的免疫原對(duì)應(yīng)人BAF57/SMARCE1蛋白（UniProt ID: Q969G3）第361位至C端（第411位）之間的區(qū)域，具體表位位于第360位殘基與C端之間。參考序列登錄號(hào)為NP_003070.3，對(duì)應(yīng)GeneID 6605。該C端區(qū)域在BAF57蛋白中相對(duì)保守，且不同于與其他SWI/SNF亞基相互作用的N端結(jié)構(gòu)域，因此本抗體能夠特異識(shí)別BAF57全長蛋白，同時(shí)避免與復(fù)合物中其他組分發(fā)生交叉反應(yīng)。
四、生產(chǎn)與親和純化工藝
抗體采用固相載體上固定的BAF57特異性表位進(jìn)行親和純化。具體而言，將包含上述C端表位的抗原肽段偶聯(lián)至親和基質(zhì)，兔抗血清經(jīng)該親和柱層析，獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后的抗體保存在Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，并添加0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。
五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
抗體應(yīng)在2°C至8°C條件下儲(chǔ)存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲(chǔ)存條件下有效期為1年。緩沖液中的疊氮化鈉可能會(huì)抑制過氧化物酶標(biāo)記檢測體系，若計(jì)劃將本抗體用于HRP偶聯(lián)二抗的檢測系統(tǒng)（如WB或IHC中的信號(hào)放大），建議通過透析或脫鹽步驟去除疊氮化鈉，或選擇與疊氮化鈉兼容的檢測試劑。
六、應(yīng)用指南與優(yōu)化參數(shù)
以下稀釋度和操作條件基于產(chǎn)品驗(yàn)證數(shù)據(jù)提供。所有蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)均需使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對(duì)于不同實(shí)驗(yàn)類型，需注意二抗的選擇差異。
免疫組織化學(xué)（IHC）
推薦稀釋度：1:500 – 1:2,000
關(guān)鍵操作要點(diǎn)：
對(duì)于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，必須進(jìn)行抗原修復(fù)。
推薦使用枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)，可采用微波爐或高壓鍋加熱。
修復(fù)后需自然冷卻至室溫，再進(jìn)行封閉和一抗孵育。
由于抗體未直接標(biāo)記，需配合HRP或熒光標(biāo)記的抗兔二抗進(jìn)行檢測。
建議：初次使用本抗體進(jìn)行IHC時(shí)，可從1:500稀釋度開始，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度和背景情況向上調(diào)整（最高至1:2,000）。設(shè)置已知陽性組織（如人乳腺癌或睪丸組織）作為陽性對(duì)照，并省略一抗作為陰性對(duì)照。
免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解物總蛋白
操作流程要點(diǎn)：
1. 制備細(xì)胞裂解液（推薦使用非變性裂解緩沖液，如含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40緩沖液）。
2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 μg本抗體。
3. 4°C旋轉(zhuǎn)孵育過夜，確?？乖?抗體充分結(jié)合。
4. 加入蛋白A/G瓊脂糖或磁珠，繼續(xù)孵育2-4小時(shí)。
5. 洗滌沉淀復(fù)合物3-5次后，加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮沸洗脫。
6. 洗脫產(chǎn)物進(jìn)行WB檢測時(shí)，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（而非識(shí)別重鏈的二抗），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）與BAF57（約57 kDa）信號(hào)重疊。
重要提示：在IP后WB檢測的封閉緩沖液中，建議添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020），以進(jìn)一步降低背景信號(hào)。
蛋白質(zhì)印跡（WB）
推薦稀釋度：1:2,000 – 1:10,000
通用操作條件：
封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。
一抗孵育：4°C過夜（推薦）或室溫2小時(shí)。
二抗：推薦使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）。
檢測：化學(xué)發(fā)光或顯色法均可。
樣本類型區(qū)分：
細(xì)胞裂解液WB：使用常規(guī)抗兔IgG二抗（識(shí)別重鏈和輕鏈）。
免疫沉淀后WB：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉液中添加5%正常豬血清，以消除IP過程中抗體重鏈的干擾信號(hào)。
蛋白大?。築AF57的表觀分子量約為57 kDa。建議同時(shí)上樣陽性對(duì)照裂解液（如HeLa或293T細(xì)胞裂解液）以及分子量標(biāo)記。
