高通量測序中的接頭(adapter)到底是什么

主要參考 祝讓飛 的文章及 Tufts 網(wǎng)站中的信息,特此致謝。


首先放一張測序示意圖,在DNA片段兩端所加的序列即接頭序列,也就是我們今天要講述的主角。

測序示意圖

1 基本概念

1.1 adapter

接頭,為一段已知的短核苷酸序列,用于鏈接未知的目標(biāo)測序片段

1.2 index或barcode

幾個(gè)堿基組成的寡核苷酸鏈,用于在混合測序時(shí),區(qū)分不同樣本

1.3 insert

待測序的目標(biāo)序列,位于兩個(gè)adapter之間

測序片段示意圖

測序片段包括幾個(gè)部分:universal_adapter-insert-indexed_adapter。

測序由5'端開始,最開始的幾個(gè)堿基無法測得,第一個(gè)adapter在數(shù)據(jù)輸出時(shí)去除,由于測序讀長的限制,第二個(gè)adapter通常測不到。

但是如果插入片段本身較短,測序會測穿,即會得到 insert-部分adapter 這樣的read,這里的adapter便是我們常常提到的需要去除的接頭部分。

2 序列信息

2.1 接頭序列(示例)

universal adapter:

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’

indexed adapter:

5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC(barcode)ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’

仔細(xì)看上面這對接頭序列,universal adapter的3'末端的T與待測片段新增的A配對,那么剩余序列的反向互補(bǔ)鏈為
GATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTAGATCTCGGTGGTCGCCGTATCATT

與 indexed adapter 的前面12個(gè)堿基一致
GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC,即兩段接頭序列部分互補(bǔ),形成Y型的結(jié)構(gòu)。

2.2 index序列

可根據(jù)fastq序列中的信息獲取

@HWI-ST1276:71:C1162ACXX:1:1101:1208:2458 1:N:0:CGATGT

fastq的格式信息不再贅述,第一行最末的 CGATGT 即本次測序所使用的index。

3 去接頭的軟件

常見的相關(guān)軟件包括 Trimmomatic、cutadapt、fastx_toolkit、fastp 等。

關(guān)于Trimmomatic的使用,可以參見wangpeng905的文章,介紹很全面。

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