原理：Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品裂解或勻漿過程中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機(jī)層。RNA存在于水樣層中。收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀來還原。在除去水樣層后，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。共純化DNA對(duì)于樣品間標(biāo)準(zhǔn)化RNA的產(chǎn)量十分有用。

Trizol試劑可用于小量樣品（50~100mg組織，5×106細(xì)胞），也可用于大量樣品（≥1g組織或≥107細(xì)胞），對(duì)人、動(dòng)物、植物和細(xì)菌、血液提取都適用，可同時(shí)處理大量不同樣品。一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可完成反應(yīng)，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northern

blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保護(hù)分析等。

本試劑為紅顏色，便于區(qū)分水相和有機(jī)相，同時(shí)最大限度的保持RNA的完整性。

保存條件：2~8℃避光保存12個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備的試劑：

Trizol，氯仿，異丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水。

實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備的物品：

1ml注射器，1.5ml EP管（DEPC處理過），大、中、小號(hào)槍頭（DEPC處理）

樣品前處理注意點(diǎn)：

選擇新鮮血液，不得超過4小時(shí)。

選擇新鮮組織，生長(zhǎng)旺盛的組織。

選擇新鮮的幼嫩組織。

選擇處于生長(zhǎng)旺盛的時(shí)期收集細(xì)胞。

RNA純化要求：

純化后不應(yīng)存在對(duì)酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。

排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染。

蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。

排除DNA分子的污染。

RNA提取的注意事項(xiàng)：

杜絕外源酶的污染。

嚴(yán)格戴好口罩，手套。

實(shí)驗(yàn)所涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等要徹底處理。

實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。

阻止內(nèi)源酶的活性。

選擇合適的勻漿方法。

選擇合適的裂解液。

控制好樣品的起始量。

明確自己的提取目的。

任何裂解液系統(tǒng)在接近樣品最大起始量時(shí)，提取成功率急劇下降。

RNA提取成功的唯一經(jīng)濟(jì)的標(biāo)準(zhǔn)是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的一次成功，而不是得率。

Rnase污染的10大來源

手指頭

槍頭

水/緩沖液

實(shí)驗(yàn)臺(tái)面

內(nèi)源Rnase

RNA樣品

質(zhì)粒提取

RNA保存

陽離子（Ca，Mg）

后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用的酶