聚丙烯酰胺凝膠必須由丙烯酰胺單體、聚合起始物、催化劑以及合適的鹽及緩沖液的混合物聚合起來。

丙烯酰胺與BIS (N, N’ – 亞甲雙丙烯酰胺）是形成膠基質(zhì)的單體。

過硫酸銨啟動膠的聚合過程。膠的配方要求10% 以水配制的過硫酸銨溶液。大多數(shù)資料顯示需要現(xiàn)配現(xiàn)用。但是，10 ％溶液可以在4℃放置數(shù)周而沒有明顯的活性丟失。最多配制10 ml, 當膠不能聚合時丟棄。

溫馨提示：丙烯酰胺的百分比在測序膠和蛋白質(zhì)膠中是不一樣的。如果使用預(yù)制的丙烯酰胺：BIS 溶液，確保拿對瓶子。

TEMED (N, N, N’, N’ －四甲基乙二胺）是催化劑，裝在棕色瓶中，置于冰箱。在即將倒膠之前添加。

聚丙烯酰胺測序膠加有膠緩沖液(TBE) 與尿素。尿素是變性劑，使DNA 反應(yīng)中發(fā)夾環(huán)不易形成。

聚丙烯酰胺電泳所用的玻璃板在每次電泳之前及之后都應(yīng)洗凈。電泳之后，用軟刷子和布在熱肥皂水中清洗，再用蒸餾水淋洗，豎立待干。

水分及灰塵會導(dǎo)致帶空洞的聚合物。電泳之前，用玻璃清潔劑清洗玻璃板，用軟刷擦拭。蒸餾水淋洗，再用擦拭紙徹底擦干。用紙擦拭之前先用70% 乙醇沖洗有助于清潔，加速干燥。依次加樣丙烯酰胺： BIS 、水、緩沖液、過硫酸銨、TEMED。混搖均勻，立即傾倒。

聚丙烯酰胺聚合前并不一定要脫氣。（丙烯酰胺過去放置于真空中以除去氣泡，因為氧氣抑制聚合。）

水平膠點樣小竅門。

組裝膠盒

放一張黑色紙于膠盒下方，黑色背景使點樣孔看得更清楚。

膠槽倒?jié)M緩沖液，剛好蓋過膠體。

如果邊上有燈，打開燈，讓光直照膠體。把樣品吸入移液器。

使用自動移液器。

插在10-200μ1 移液器上的槍頭可用于大多數(shù)點樣孔。對于非常小的（小于10μ1) 點樣孔，用測序膠所用的長移液頭比較方便。

將移液頭剛好浸入樣品，緩慢地吸入移液頭。樣品可能會因甘油而顯黏稠，快速抽吸可能會把氣泡吸入移液頭。

樣品吸入移液頭之后，將移液頭輕輕靠在管子邊上，或者擦拭紙吸走移液頭外邊的液滴。注意別吸走樣品。

將樣品點到樣品孔中

移液器上保持一點點壓力，使樣品略微溢出移液頭。

把移液頭插進緩沖液，略高于點樣孔，保持正壓。移液頭的尖端部分可以伸進點祥孔。

緩慢而穩(wěn)定地把樣品打出去。移液頭尖處于點樣孔上方，樣品會沉入孔中。讓樣品下沉充滿樣品孔，而不是推入。

一旦最后一滴樣品打出移液頭，將移液器推到第二檔，緩慢地抬高移液器，移出緩沖液外

如何進行垂直膠的點祥？

垂直膠的點樣孔形成于兩塊玻璃板之間。在非常薄的膠中，移液器移液頭甚至不能插入到兩塊玻璃板之間。注意甘油！把移液頭置于樣品孔上方，樣品會沉入到孔中。

點樣之前，一定要把垂直型聚丙烯酰凝膠的點樣孔沖洗干凈。沖走未聚合的丙烯酰胺和樣品孔底部可能出現(xiàn)的水，水可以使樣品孔明顯變小。用25ml 或者50ml 注射針筒和18 號針頭。抽入電泳緩沖液，小心地沖洗樣品孔中的水。

可能很難看清樣品孔，但是點一個樣之后，其余的就變得容易了。如果有多余的孔，可以用樣品緩沖液與溴酚藍試驗。