一、DNA電泳相關(guān)：
1、DNA電泳緩沖液：
（1）Tris-乙酸（TAE）緩沖液：TAE較為常用，且價(jià)格低，但其緩沖能力較弱。所以TAE電泳需要蠕動(dòng)泵使兩極貯液槽進(jìn)行液體循環(huán)，而且TAE需要經(jīng)常更新；且要加入EDTA，目的在于鰲合二價(jià)離子，抑制DNase，以保護(hù)DNA。
①?TAE使用液：
1×：40mmol/L ?Tris-乙酸
1mmol/L ? EDTA
②?TAE貯存液（每L）：
50×：242g ????Tris堿
57.1ml ??冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
（2）Tris-硼酸（TBE）緩沖液：
①?TBE使用液：
0.5×：0.045mol/L ?Tris-硼酸
1mmol/L ??? EDTA
②?TBE貯存液（每L）：
5×：?54g ????Tris堿
27.5ml ??硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
（3）Tris-磷酸（TPE）緩沖液：
①?TPE使用液：
1×：90mmol/L ?Tris-磷酸
2mmol/L ? EDTA
②?TPE貯存液（每L）：
10×：108g ????Tris堿
15.5ml ??85%磷酸
40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
2、1%（線性DNA分子大小為400-6000）瓊脂糖凝膠DNA電泳操作過程：
①制膠：按要求取1g瓊脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）電泳緩沖液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波爐中加熱至瓊脂糖溶解（一般中低火溫，3-5min即可）；
②溶液冷卻至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混勻；
③迅速倒入備好的膠模中；
④凝膠完全凝固后，小心移去梳子和封口膠帶，將凝膠放入電泳槽中；
⑤加入能沒過膠面1mm深的電泳緩沖液（TAE）；
⑥D(zhuǎn)NA樣品與加樣緩沖液（溴酚藍(lán)）混合后，用微量移液吸頭加樣；
⑦蓋上電泳槽并通電，使DNA向正極移動(dòng)（黑極→紅極），1-5V/cm（80V電壓左右）進(jìn)行電泳（30min左右）；
⑧電泳完畢，切斷電源，取出凝膠于紫外投射光源下觀察并拍照。
二、12％SDS-PAGE?的相關(guān)溶液
1、5×加樣緩沖液：
10% w/v SDS，10 mM DTT或β-巰基乙醇，20% v/v甘油，0.2M Tris-HCl pH 6.8，0.05% w/v?溴酚藍(lán)。??（注意：將不含DTT的1×SDS凝膠上樣緩沖液置于室溫下儲(chǔ)存，臨用前從1mol/L DTT儲(chǔ)液中添加到上述緩沖液中。）
5×Sample Buffer：
10% w/v SDS
10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol
20% v/v Glycerol ?
0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.8
0.05% w/v Bromophenolblue
另：2×SDS?上樣液緩沖液:
100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL ,?溴酚藍(lán)0.2 g ,DTT3g;
2、1×電泳緩沖液：
25 mM Tris-HCl pH 8.8，200 mM?甘氨酸，0.1% w/vSDS。
1×Running Buffer
25mmol/L Tris-HCl pH 8.8
200～250mmol/L ???Glycine（電泳級）（pH 8.3）
0.1% w/v SDS
可以配成5×貯存液，在900ml去離子水中溶解15.1gTris堿和94g甘氨酸，然后加入50ml 10%（m/v）電泳級SDS的貯存液，用去離子水補(bǔ)至1000ml即可。
3、分離膠配方：
H2O 10.5，1.5 M Tris-HCl pH8.8 ?7.5，20% w/v SDS 0.15，30%?丙烯酰胺?/ 0.8%?亞甲雙丙烯酰胺(/w/v) ?12.0，10% w/v?過硫酸銨?15，TEMED ?0.02（單位：mL，總體積25 mL）。注：過硫酸銨會(huì)緩慢分解，故應(yīng)每周新鮮配制，可用去離子水配制少量10%（m/v）儲(chǔ)存液于4℃保存。
Running Gel Solution (mL)?：
H2O ??????????????????????????????????????????????10.2
1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8 ?????????????????????????????7.5
20% SDS (w/v) ????????????????????????????????????0.15
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v)?12.0
10% ammonium persulfate (w/v)?0.15
TEMED 0.02
4、積層膠配方(4%?丙烯酰胺)：
H2O 3.05，0.5 M Tris-HCl pH6.8 1.25，20% w/v SDS 0.025，30%?丙烯酰胺?/ 0.8%?亞甲雙丙烯酰胺(/w/v) 0.65，10% w/v過硫酸銨?0.025，TEMED 0.005（單位：mL，總體積5 mL）。
Stacking Gel Solution (4% Acrylamide) (mL)：
H2O ????????????????????????????????????????????????3.075
0.5 mol/L Tris-HCl pH6.8 ??????????????????????????????1.25
20% SDS (w/v) ??????????????????????????????????????0.025
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v)?0.67
10% ammonium persulfate (w/v)?0.025
TEMED 0.005
5、考馬斯亮藍(lán)染色液：
0.25 g考馬斯亮藍(lán)R250溶解于90 mL甲醇：水（1:1 v/v）和10 mL冰乙酸的混合液中，過濾除去顆粒狀物質(zhì)。（或考馬斯亮藍(lán)R-250 0.5g ,乙醇250mL ,乙酸110mL ,水740mL ,混勻;）
另：0.2％考馬斯亮蘭R-250染液：
甲醇?????????????????????????????? 46.5ml
醋酸?????????????????????????????? 7.0ml
考馬斯亮蘭???????????????????????? 0.2g
蒸餾水???????????? ????????????????加至100ml
6、脫色液：
170 mL甲醇,加70 mL冰乙酸，加蒸餾水定容至1000 mL。
三、蛋白質(zhì)純化的相關(guān)溶液
1、超聲破菌緩沖液：
20mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5mol/L NaCl、1mmol/L EDTA、1mg/mL溶菌酶
2、包涵體洗滌緩沖液：
20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，2 mol/L尿素，2％?Triton。?
3、包涵體溶解緩沖液：
20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5 mol/L NaCl，8 mol/L尿素，0.2 mmol/L DTT或100 mmol/L β-巰基乙醇，2％Triton。
4、Ni2+親和層析柱純化緩沖液：
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
結(jié)合緩沖液（pH7.8）：
20mmol/L?磷酸鈉
500mmol/L NaCl
洗滌緩沖液（pH6.0）：
20mmol/L磷酸鈉
500mmol/LNaCl
咪唑洗脫緩沖液（pH6.0）：
20mmol/L?磷酸鈉
500mmol/L NaCl
在洗滌緩沖液（pH6.0）中加入適量3mol/L咪唑分別配成10mmol/L、50mmol/L?、100mmol/L和150 mmol/L的咪唑洗脫緩沖液。
Triton X-100(10% v/v)
酶和緩沖液：
DNase(1mg/ml)
溶菌酶
RNase(1mg/ml)
5、2％Triton X－100溶液：
?量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M緩沖液98ml即可。
6、50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)：
稱取0.5克PEG，用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量37℃予熱的MEM培養(yǎng)液，混勻，保溫在37℃水浴中待用。
7、1％SDS(十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate,SDS)：?
?SDS???????????????????????????????? 10g
?45％乙醇??????????????????????????? 100ml
8、1mol/LTris(三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8：
Tris???????????????????????????????? 12.114g
蒸餾水????????????????? ?????????????lOOml
先將Tris溶于少量蒸餾水，用HCI調(diào)pH至7.8，然后加水至100ml
四、PH緩沖液的配制：
（1）磷酸緩沖鹽溶液（PBS）：
①??137mmol/L NaCl
2.7mmol/L KCl
10mmol/L Na2HPO4
2mmol/L KH2PO4
用800ml蒸餾水溶解8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4。用HCl調(diào)節(jié)溶液的PH值至7.4，加水至1L。分裝后在15psi（1.05kg/cm2）高壓蒸汽滅菌20min，或過濾除菌，保存于室溫。（注：PBS是一種通用試劑，值得指出的是上述列出的配方缺乏雙價(jià)陽離子，如果需要，PBS可以補(bǔ)加成1mmol/L CaCl2和0.5mmol/L MgCl2）
②?0.01mol／LPBS(磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Saline，PBS)，pH7.2：
A：0.2mol／L磷酸氫二鈉液(甲液)：?
NaH2PO4·12H2O?????????????????????? 35.814g
雙蒸水?加至500ml
B：0.2mol／L磷酸二氫鈉液(乙液):
NaH2PO4·2H2O?????????????????????? 15.601g
雙蒸水?加至500ml
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl 8.2克，加雙蒸水至1000ml?；靹虼耆芙夥盅b，經(jīng)高壓滅菌后保存于4℃冰箱備用。
③?1/15 mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)：
甲液：1/15 mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO49.465g
蒸餾水??????????????????加至1000ml
乙液：l/15 mol/L KH2PO4溶液
KH2P049.07g
蒸餾水??????????????????加至1000m1
分裝在棕色瓶內(nèi)，于4℃冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
（2）10×Tris EDTA(TE):
①pH 7.4:
100mmol/L Tris-Cl(pH7.4)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
②pH 7.6:
100mmol/L Tris-Cl(pH7.6)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
③pH 8.0:
100mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
10mmol/L EDTA(pH8.0)
分裝后在15psi（1.05kg/cm2）高壓蒸汽滅菌20min，保存于室溫。
（3）Tris-Cl（1mol/L）:
用800ml蒸餾水溶解121.1gTris堿，加濃鹽酸調(diào)pH?至所需值。
pH ????????????HCl
7.4 ???????????70ml
7.6 ???????????60ml
8.0 ???????????42ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后，方可最后調(diào)定pH?值。加水定容至1L。分裝后高壓蒸汽滅菌。如果1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄。并使用質(zhì)量更好的Tris。Tris溶液的pH?值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH?值大約降低0.03單位，0.05mol/L溶液在5℃，25℃和37℃時(shí)的pH?值分別為9.5，8.9和8.6。
（4）Tris緩沖鹽溶液（TBS）：
用800ml蒸餾水溶解8g NaCl，0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L。分裝后在15 psi（1.05 kg/cm2）高壓下蒸汽滅菌20min，保存于室溫。
五、常用緩沖液配制：
（1）碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液
貯備液A：0.2 mol/L碳酸鈉（Na2CO3·H2O 24.8g配成1000ml）；
貯備液B：0.2 mol/L碳酸氫鈉（NaHCO3?16.8g配成1000ml）。
x ml A液?+ y ml B液稀釋至200ml
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
（2）磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液
貯備液A：0.2 mol/L磷酸二氫鈉（NaH2PO3·H2O 27.6g或NaH2PO3·2H2O 31.21g配成1000ml）；
貯備液B：0.2 mol/L磷酸氫二鈉（Na2HPO3·2H2O 35.61g或Na2HPO3·12H2O 71.64g配成1000ml）。
x ml A液?+ y ml B液稀釋至100ml
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
（3）Tris-HCl緩沖液
貯備液A：0.2 mol/L三羥甲氨基烷（Tris-ydroxy methyLamino methanne,C4H11NO3，24.2g配成1000ml）；
貯備液B：0.2 mol/L鹽酸（濃HCl?17.1ml配成1000ml）。
50ml ml A液?+ x ml B液稀釋至200ml
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
（4）檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液
貯備液A：0.1 mol/L檸檬酸（C6H8O7，19.21g配成1000ml）；
貯備液B：0.1 mol/L檸檬酸鈉（C6H5O7Na3·2H2O 29.41g配成1000ml）。
x ml A液?+ y ml B液稀釋至100ml
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
（5）醋酸-醋酸鈉緩沖液
貯備液A：0.2 mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀釋至1000ml）；
貯備液B：0.2 mol/L醋酸鈉（C2H2O2Na 16.4g或C2H2O2Na·3H2O 27g配成1000ml）。
x ml A液?+ y ml B液稀釋至1000ml
格式變形，參考“生命科學(xué)技術(shù)摘集”
六、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合溶液：
1、0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA混合消化液：
胰蛋白酶(Trypsin)粉???????????????? 0.25g
EDTA粉???????????????????????????? 20.0mg
0.01mol／L PBS????????????????????? 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合，置37℃水浴中1小時(shí)左右(待徹底溶解，液體呈透明為止)，用G5抽濾，分裝置4℃冰箱中保存。
2、Hanks液：
（1）原液
①原液甲：
??NaCl???????????????????????????????? 160g
??KCl?????????? ????????????????????????8g
MgSO4·7H2O???????????????????? 2g
MgCI2·6H2O???????????????????????2g
??溶于800ml餾水中。
CaCl2(無水)????????????????????????2.8g
??溶于100ml蒸餾水中。
??將兩種液體混合后，加水至1000ml用濾紙濾過，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱備用。
②原液乙：
Na2HPO4·12H2O??? ???????????????3.04g
KH2PO41.2g
??葡萄糖?????????????????????????????????20.0g
??溶于800ml蒸餾水中，用濾紙過濾，然后加0.5％酚紅80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱備用。
（2）使用液
甲乙兩液各1份，雙蒸水18份，混勻分裝包扎好瓶口，經(jīng)10磅15分鐘高壓滅菌后置4℃冰箱中保存。使用時(shí)用5.6％NaHCO3調(diào)pH值到所需要求。
3、LB培養(yǎng)基（Luria-Bertani培養(yǎng)基）：
每升培養(yǎng)基含有：
細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨（bacto-trytone）??????????10g
細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物（bacto-yeast extract）??????5g
氯化鈉（NaCl）??????????????????????????????10g
在950ml重蒸水中分別加入上述組分，搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)完全溶解，用5mol/L氫氧化鈉（NaOH）（約0.2ml）調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入重蒸水定容至1L，在1.034×105Pa高壓蒸汽滅菌20min。（液體培養(yǎng)基）
另：固體培養(yǎng)基（含有瓊脂或瓊脂糖的培養(yǎng)基）
按照上述配方配制液體培養(yǎng)基，高壓滅菌前加入下列試劑中的一份：
細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂（Bacto-Agar）??????15g/L(鋪制平板用)
細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂（Bacto-Agar）??????7g/L(配制頂層瓊脂用)
瓊脂糖????????????????????????????15g/L(鋪制平板用)
瓊脂糖????????????????????????????7g/L(配制頂層瓊脂用)
在15psi（1.05kg/cm2）高壓下滅菌20min。從高壓鍋取出培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)輕輕旋動(dòng)以使溶解的瓊脂或瓊脂糖能夠均勻分布在整個(gè)培養(yǎng)基溶液中。必須小心，此時(shí)培養(yǎng)基溶液可能過熱，旋動(dòng)液體可能會(huì)發(fā)生暴沸。應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50～60℃，方可加入不耐熱的物質(zhì)（如抗生素，加Amp的量為1:100）；為避免產(chǎn)生氣泡，混勻培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)采用旋動(dòng)的方式。然后可直接從燒瓶中倒置平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿每個(gè)需約30～50ml的培養(yǎng)基。如果平板上的培養(yǎng)基有氣泡形成，可在瓊脂或瓊脂糖凝結(jié)前用本生煤氣噴射燈灼燒培養(yǎng)基表面以除去之。設(shè)定顏色記號在相應(yīng)平板的邊緣作記號以區(qū)別不同的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基完全凝固后，應(yīng)倒置平板并貯存于4℃?zhèn)溆谩Ｊ褂们?-2h應(yīng)取出貯存的平板。如果平板是新鮮配制的，在37℃溫育時(shí)會(huì)“發(fā)汗”，便會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌菌落或噬菌體噬菌斑在平板表面擴(kuò)散而增加交叉污染的機(jī)會(huì)。為避免這一問題，可以拭去平皿內(nèi)部的冷凝水并把平板倒置，37℃溫育數(shù)小時(shí)方予使用，也可以快甩一下平皿以除去冷凝水，為盡可能減少污染，除去蓋上的水滴時(shí)，應(yīng)把開蓋的平板呈倒置狀態(tài)拿著。
4、Amp：抗生素（氨芐青霉素），濃度50mg/ml（溶于水），溫度-20℃，工作液（嚴(yán)密型質(zhì)粒：20μg/ml；松弛型質(zhì)粒60μg/ml）
5、IPTG：isopropyl-β-D-thiogalactoside(異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)，作為蛋白質(zhì)誘導(dǎo)劑。母液1M/L，工作液1mM/L
