一、圖像預處理：
選擇Image > Type，轉化為8-bit;
此時圖片偏暗，對圖像做適度的調整，Adjust > Brightness/Contrast
二、測定脂肪滴大小
思路：
1. 標尺校正：
選擇劃線工具，在圖片上畫出與標尺長度相同的線段（按住shift拉出直線），
然后選擇 Analyze > Set scale；
Distance in pixels：線段在圖中的測定值
know distance:已知的長度
unit of length:單位設置
Global：如果選擇則可以在多張圖片之間保持一致；
添加標尺：
自動添加：Analysis > Tools > Scale Bar
width in bar：設置標尺的長度
可以填寫字的大小、寬度、顏色、位置等，
手動添加：選擇直線工具，劃線，Analysis > Tool > Scale Bar
2. 圖像閾值：
依次選擇Image > Adjust >Threshold，
在調出的窗口欄調節(jié)滑塊，使得細胞的邊界明晰以便于機器識別，最后點擊Apply；
此時看到，許多脂肪第粘連一在一起，而機器無法識別，可以
Process > Binary > Watershed
3. 不規(guī)則形態(tài)的測定：
依次選擇Analyze > Tools > ROI Manger
A. 對于獨立的單個脂肪滴，選擇魔棒工具選中后，單擊Add[t]選中區(qū)域；如下圖：
B. 對于被遮蓋住的脂肪滴，可以選擇圓形工具，畫出相應大小的圓后，操作如上：
當選中所有的圖形后，單擊ROI Manger中的Measure，彈出計算結果。
3. 規(guī)則形態(tài)的測定：
如果圖片脂肪滴無重疊，則可以使用軟件內置參數自動計數；
圖像預處理等操作同上，然后依次單擊Analyze > Particles
Size（um^2）:形狀大小范圍設定。計算前應粗略估計細胞的大小范圍，排除非細胞的形態(tài)。具體操作為選擇多邊形工具，畫出最大細胞的輪廓，然后單擊Analyze > Measure，記下彈出菜單顯示細胞的面積值,統(tǒng)計記下最小面積值；
Show: 選擇outlines可以標記出形狀輪廓；
其他可選操作：
拍照轉化為灰度后脂肪滴中間出現空洞，可以將圖片空洞填補：操作如下:
Process > Binary > Make Binary
Process > Binary > Fill holes重疊脂肪滴在計算時候，形成一個整體，造成計算錯誤。
Process > Binary > Watershed
參考資料：
巧用Image J計算細胞大小
ImageJ圖像加標尺scalebar并用標尺校正圖片尺寸測量細胞大小
Image J入門教程，細胞面積計算
