1材料和方法

1.1實驗動物

健康雄性昆明種小鼠70只，體質(zhì)量(25±2)g。所有小鼠先在實驗室適應(yīng)2d，確定其活動、進(jìn)食均無異常后用于實驗

1.2試劑與儀器:

氫溴酸東莨菪堿;亞硝酸鈉;無水乙醇。Morris 水迷宮和visutrack動物行為分析軟件（上海欣軟）。

1.3 Morris水迷宮的方法

Morris水迷宮實驗:30只小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組，空白組10只，東莨菪堿組10只，乙醇組10只，Morris水迷宮實驗包括定航實驗和主動探索實驗。前4d為定航實驗，每天訓(xùn)練4次，每次從不同的入水點將小鼠面向池壁放入水池。水面高出平臺1cm，水中加入適量墨汁，使小鼠看不到平臺，溫度維持在22～24℃。測試時間為90s，在平臺上停留超過2s即為尋臺成功。每次測試前小鼠在平臺上有10s的前適應(yīng)，測試完畢無論成功與否還有10s的后適應(yīng)。小鼠從入水到尋臺成功所需時間記作逃避潛伏期，尋臺失敗則逃避潛伏期記作90s，每一天訓(xùn)練4次結(jié)果的平均值作為當(dāng)天訓(xùn)練的總結(jié)果。第5天為探索實驗，撤去平臺，選擇平臺所在象限對角象限作為入水點，記錄90s內(nèi)小鼠的穿臺次數(shù)。

圖1 水迷宮的基本構(gòu)造

1.4Morris水迷宮實驗?zāi)Ｐ徒?/p>

①記憶獲得障礙模型在動物進(jìn)行定航和主動探索實驗之前15～20min，給動物腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(膽堿能M受體拮抗劑，1mg/kg).②記憶再現(xiàn)障礙模型于動物下次測試之前15min給小鼠灌服乙醇(35%，0.1mL/10g體質(zhì)量)，15min后進(jìn)行重測試。主要觀察指標(biāo):避暗實驗中的避暗潛伏期、避暗錯誤次數(shù)、小鼠將頭部及前爪全部伸入洞口的次數(shù)(簡稱探頭數(shù));Morris水迷宮實驗中的每次訓(xùn)練定位航行逃避潛伏期的時間和主動探索穿越平臺的次數(shù)。

水迷宮實驗儀器 型號XR-XM101 上海欣軟

2 Morris水迷宮實驗結(jié)果

2.1定位航行實驗結(jié)果

由圖3可知，與空白對照組比較，隨著時間的延長，東莨菪堿模型組小鼠每日定航實驗中逃避潛伏期均顯著延長(P＜0.05或P＜0.01)，乙醇模型組小鼠逃避潛伏期也延長，但無明顯差異。

圖3 東莨菪堿模型和乙醇模型小鼠逃避潛伏期時間比較

由圖4可知，東莨菪堿模型組小鼠每日定航實驗中總路程仍明顯增多(P＜0.05或P＜0.01)，乙醇模型組與空白組相比無明顯差異。

圖4 東莨菪堿模型和乙醇模型小鼠定位航行總路程比較

2.2主動探索實驗結(jié)果

訓(xùn)練結(jié)束后，第5d為主動探索實驗，撤去平臺，選擇平臺所在象限對角象限作為入水點，記錄90s內(nèi)大鼠的穿臺次數(shù)。由圖5可見，東莨菪堿模型組穿越平臺的次數(shù)較空白組明顯減少(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。乙醇模型組與空白對照組相比無明顯變化。

圖5 東莨菪堿模型和乙醇模型小鼠主動探索次數(shù)比較

3討論

Morris水迷宮是一種經(jīng)典的學(xué)習(xí)記憶功能評價方法，定航實驗和探索實驗分別反映了動物的空間學(xué)習(xí)能力和空間記憶能力。本實驗的定位航行和主動探索實驗結(jié)果顯示:東莨菪堿小鼠模型組定位航行逃避潛伏期明顯延長而主動探索穿越平臺的次數(shù)明顯減少(p＜0.01或p＜0.05)，乙醇模型組無明顯差異(p＞0.05)。提示東莨菪堿能夠造成空間學(xué)習(xí)記憶障礙模型，而乙醇組不能作為空間學(xué)習(xí)記憶障礙模型的造模藥物。

綜上所述，本文綜合比較了三種不同藥物建立的學(xué)習(xí)記憶障礙模型，對其形成記憶損傷的持續(xù)時間和用藥劑量進(jìn)行摸索和比較，成功建立了有效的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型，在恰當(dāng)?shù)臅r間進(jìn)行藥物干預(yù)，從而更好地評價改善學(xué)習(xí)記憶障礙新藥的效果。