前言
Immugent在之前寫過一篇推文：腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可誘導(dǎo)免疫耐受進(jìn)而促進(jìn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移中，解讀了一個(gè)關(guān)于腫瘤細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移如何誘導(dǎo)免疫耐受從而促進(jìn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的故事。這項(xiàng)研究可以說是Immugent看過的設(shè)計(jì)最精細(xì)、論證最扎實(shí)，以及結(jié)果最能反應(yīng)本質(zhì)的文章之一。雖然之前讀過幾遍了，但由于對(duì)它的印象極為深刻，因此最近又拿出來讀了兩遍。
畢竟是發(fā)表在Cell正刊上的文章，其研究內(nèi)容也并不是所有人都能理解的?？紤]到此因素，Immugent決定再來深入解剖一下這項(xiàng)研究，并對(duì)其中設(shè)計(jì)比較精妙的實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行舉例解讀。
不過，由于小編理解能力也有限，并且做過的實(shí)驗(yàn)也不多，并不能完全get到作者全部的精髓，還是需要提前給自己搞一個(gè)免傷buff。因此有小伙伴覺得理解不對(duì)的地方，可以通過后臺(tái)聯(lián)系我們，進(jìn)行溝通交流。
主要內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)一：制備淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系
文章的起點(diǎn)，也是特色之一，就是通過自體選擇制備出不同亞型的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞克隆型。其實(shí)這個(gè)實(shí)驗(yàn)操作不難，但是想法很大膽，而且是通過多次自體篩選出不同代數(shù)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系。我們知道即使是腫瘤細(xì)胞系，但仍是一種程度很高的異質(zhì)體，里面存在各式各樣的克隆型，具體表現(xiàn)在其能否被免疫系統(tǒng)有效識(shí)別，以及能否具有進(jìn)化出免疫逃逸的潛力。前者表現(xiàn)在其是否可以被機(jī)體免疫系統(tǒng)快速清除，后者這是和其能否成功進(jìn)化出免疫耐受相關(guān)。在這個(gè)體系中，能被免疫系統(tǒng)快速有效識(shí)別的腫瘤細(xì)胞克隆型都會(huì)被機(jī)體很快清除；而正是有一些腫瘤細(xì)胞雖然可以被機(jī)體免疫系統(tǒng)有效識(shí)別，但是可以迅速進(jìn)化出免疫逃逸的能力。這類腫瘤細(xì)胞就隨后就可以逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，遷移到別處。
實(shí)驗(yàn)二：使用免疫缺陷鼠研究免疫細(xì)胞的角色
在講實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)之前先來普及一下基礎(chǔ)知識(shí)：Rag2-/-小鼠體內(nèi)缺少成熟的T/B細(xì)胞，是一種常用的免疫缺陷鼠；而Rag2-/-;Il2rg-/-小鼠體內(nèi)則是除了缺少成熟的T/B細(xì)胞外，還缺少NK細(xì)胞，是一種更嚴(yán)重的免疫缺陷鼠；最后NOD-scid IL2Rgnull (NSG)小鼠，則是由Prkdc基因及Il2rg基因的敲除突變導(dǎo)致的免疫缺陷型小鼠，是目前免疫缺陷程度最高的工具小鼠。其小鼠缺乏成熟的T、B以及NK，且不生成免疫球蛋白，樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells, DC）功能異常，非常適合人源細(xì)胞或組織移植。
作者為了研究淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移是否和免疫細(xì)胞攻擊壓力有關(guān)，而選擇了這多種免疫缺陷鼠。首先是通過對(duì)比正常小鼠和免疫缺陷鼠（Rag2-/-;Il2rg-/-）腫瘤生長，證明了免疫細(xì)胞可以發(fā)揮抗腫瘤生長作用；更進(jìn)一步的結(jié)果表明，與野生型移植淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞系相比，NSG小鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤不促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移率，這表明淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇是促使腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的主要誘因。
實(shí)驗(yàn)三：研究Treg功能的小鼠模型
為了研究Treg是否也在腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，作者使用了Foxp3DTR小鼠，這種小鼠體內(nèi)特異性缺少Treg細(xì)胞。作者在對(duì)正常小鼠以及Foxp3DTR小鼠靜脈注射B16-F0-tdTomato細(xì)胞，隨后發(fā)現(xiàn)全系統(tǒng)Treg的缺失可顯著減少肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量。隨后為了進(jìn)一步研究Treg在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用，作者使用了FoxP3EGFP小鼠，這種小鼠產(chǎn)生的Treg都帶有GFP熒光標(biāo)記，因此我們可以通過檢測GFP熒光強(qiáng)度來監(jiān)測Treg細(xì)胞的功能。
實(shí)驗(yàn)四：區(qū)分來源和研究抗原特異性的小鼠模型
最后來說一下OT-I/OT-II小鼠，這兩種小鼠體內(nèi)都只產(chǎn)生OVA（Ovalbumin，卵清蛋白）抗原特異的T細(xì)胞，當(dāng)OVA注射給小鼠會(huì)引發(fā)免疫反應(yīng)。其中，OT-1小鼠是體內(nèi)CD8+T特異性識(shí)別OVA；OT-11小鼠是體內(nèi)CD4+T特異性識(shí)別OVA。因此，利用這兩種小鼠模型，我們就可以研究抗原特異性的CD8/4T細(xì)胞的功能。這張圖還涉及到另一種標(biāo)記免疫細(xì)胞特異性來源的小鼠模型，就是CD45.1/45.2小鼠。這兩種小鼠也是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的小鼠模型，一般在co-transfer實(shí)驗(yàn)中對(duì)不同來源的免疫細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，
展望
不知道大家有沒有和小編同樣的感受，就是會(huì)打心底覺得遇到一篇好文章是很幸運(yùn)的一件事。當(dāng)讀到一篇比較有學(xué)習(xí)價(jià)值的文章后，小編會(huì)覺得比吃一頓大餐還要開心；而且往往這類文章需要重復(fù)閱讀，因?yàn)槊看伍喿x后的感受不一樣，收獲到的知識(shí)也不一樣。
對(duì)于這項(xiàng)研究來說，雖然得到的很多結(jié)果都是目前公認(rèn)的，或者感受到的，但是其中的大多數(shù)都缺少堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來證實(shí)。而這項(xiàng)研究的作者不僅對(duì)每一個(gè)發(fā)現(xiàn)都進(jìn)行足夠的驗(yàn)證，而且還很巧妙的將它們串到一起，特別是對(duì)每一種免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境承擔(dān)的角色都解釋的非常到位。在遇到不同的生物學(xué)問題，作者都能做到使用最直接，最有力的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行論證，Immugent是覺得很受啟發(fā)。
好啦，本次分享到這就結(jié)束了啦，歡迎大家批評(píng)指正~~
[參考文獻(xiàn)]
Reticker-Flynn NE, Zhang W, Belk JA, Basto PA, Escalante NK, Pilarowski GOW, Bejnood A, Martins MM, Kenkel JA, Linde IL, Bagchi S, Yuan R, Chang S, Spitzer MH, Carmi Y, Cheng J, Tolentino LL, Choi O, Wu N, Kong CS, Gentles AJ, Sunwoo JB, Satpathy AT, Plevritis SK, Engleman EG. Lymph node colonization induces tumor-immune tolerance to promote distant metastasis. Cell. 2022 May 26;185(11):1924-1942.e23. doi: 10.1016/j.cell.2022.04.019. Epub 2022 May 6. PMID: 35525247; PMCID: PMC9149144.
