Combined Alcohol Exposure and KRAS Mutation in Human Pancreatic Ductal Epithelial Cells Induces Proliferation and Alters Subtype Signatures Determined by Multi-Omics Analysis
人類胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的酒精暴露和KRAS突變共同誘導(dǎo)增殖并改變由多組學(xué)分析確定的亞型特征
發(fā)表期刊：Cancers (Basel)
發(fā)表日期：2022 Apr 13
DOI:? 10.3390/cancers14081968
一、背景
????????胰腺導(dǎo)管腺癌目前是美國癌癥相關(guān)死亡的第四大原因，患者的5年生存率只有10%，部分原因是其高轉(zhuǎn)移率和治療抗性。改善PDAC患者的生存狀況需要詳細(xì)了解影響疾病進(jìn)展和治療反應(yīng)的基本分子特征。有研究發(fā)現(xiàn)，PDAC的4種不同亞型（代謝性，祖細(xì)胞樣，增殖性和炎癥性）可以為精準(zhǔn)治療提供途徑，因?yàn)閬喰涂梢灶A(yù)測治療反應(yīng)。然而，影響不同PDAC亞型發(fā)展的遺傳和環(huán)境因素需要額外的評估。
????????PDAC中四個(gè)最常突變的基因是KRAS，TP53，CDKN2A和SMAD4。超過90%的PDAC有KRAS的激活突變。KRAS是PDAC中最常觀察到的突變，但在其他癌癥類型中經(jīng)常觀察到其他RAS / RAF / MAPK途徑成員的失調(diào)和突變。野生型KRAS PDAC腫瘤通常通過BRAF突變顯示MAPK途徑的激活，這表明KRAS和BRAF突變可以在MAPK途徑的激活中相互補(bǔ)償。因此，PDAC高度依賴于MAPK途徑的激活來驅(qū)動(dòng)增殖并啟動(dòng)癌變。
????????有幾個(gè)潛在的原因和危險(xiǎn)因素與PDAC的發(fā)展有關(guān)，包括PDAC的家族史、慢性胰腺炎、吸煙、糖尿病、肥胖和飲酒，但它們與該疾病的某些亞型的發(fā)展的關(guān)系還不明確。最近的證據(jù)表明，在KRAS突變的情況下，酒精攝入會(huì)促進(jìn)PDAC的發(fā)展，這表明內(nèi)在和外在的因素共同影響PDAC發(fā)展。
二、材料與方法
1、數(shù)據(jù)來源
1） 細(xì)胞：HPNE（人胰腺巢蛋白表達(dá)）細(xì)胞；HPNE-KRAS細(xì)胞含有一個(gè)組成活性的KRAS G12D突變
2） 通過 cBioportal 訪問來自 TGCA Firehose Legacy 的 PDAC 患者的 SERPINE1 蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)
2、分析流程
1）細(xì)胞培養(yǎng)、 增殖試驗(yàn)、Caspase-3 凋亡試驗(yàn)、細(xì)胞周期分析、乙醛檢測、細(xì)胞ROS的測量、細(xì)胞ROS的測量
2） 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：肽的制備、TMT標(biāo)記、LC/MS-MS和蛋白質(zhì)鑒定
3） 差異表達(dá)：在DESeq2歸一化之后，RNA-Seq轉(zhuǎn)錄本按生物類型（Ensembl）進(jìn)行分類；R被用來生成RNA序列和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)集的分層聚類熱圖
4） GO術(shù)語分析：RNA Seq和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)的GO術(shù)語分析是通過DAVID生物信息學(xué)使用過濾的GO FAT本體術(shù)語（不包括背景集）完成的
5） 多重共慣性分析：多重共慣性分析在R語言中使用omicade4軟件包完成
6） 差異性共表達(dá)：為了研究哪些蛋白質(zhì)在HPNE中協(xié)調(diào)表達(dá)，以及乙醇和突變的KRAS如何改變協(xié)調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)，進(jìn)行了差異性共表達(dá)分析
7） 定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）、蛋白質(zhì)印跡、化療藥物治療和活力測定
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
01 - 慢性乙醇處理促進(jìn)了KRAS突變HPNE細(xì)胞的增殖
????????本研究使用了未轉(zhuǎn)化的人胰腺巢蛋白表達(dá)（HPNE）和突變的KRAS G12D轉(zhuǎn)化的HPNE（HPNE-KRAS）細(xì)胞，以評估酒精在與胰腺癌最常見早期突變事件有關(guān)的特定細(xì)胞和遺傳背景下的影響。由于個(gè)體之間行為的可變性，人類的酒精使用很難建模。酒精暴露發(fā)生在數(shù)年和十年內(nèi)，并可能通過慢性和/或急性暴露影響分子、細(xì)胞或組織。為了在6個(gè)月的短時(shí)期內(nèi)建立酒精暴露的模型，作者用100mM EtOH每2-3天處理一次HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞。這使作者能夠檢查乙醇暴露對野生型KRAS和組成型活性KRAS（G12D）表達(dá)的胰腺細(xì)胞的影響。乙醇處理6個(gè)月后，評估了細(xì)胞增殖的表型變化，并進(jìn)行了蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄組的多組學(xué)分析（圖1A）。
????????HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞都能耐受乙醇暴露，在治療期間沒有觀察到明顯的細(xì)胞死亡。在開始乙醇處理6個(gè)月后，HPNE細(xì)胞在對照和乙醇處理?xiàng)l件下的增殖沒有表現(xiàn)出任何差異（圖1B）。然而，與對照組細(xì)胞相比，用乙醇處理的HPNE-KRAS細(xì)胞顯示出其增殖率的明顯增加（圖1C）。對這些細(xì)胞在培養(yǎng)中的倍增時(shí)間的分析證實(shí)，與對照組相比，EtOH處理促進(jìn)了HPNE-KRAS的快速生長（圖1D）。與未經(jīng)處理的HPNE-KRAS對照組細(xì)胞相比，EtOH處理的HPNE-KRAS細(xì)胞的增殖與處于G1期的細(xì)胞百分比的增加有關(guān)，而處于G2期和S期的細(xì)胞數(shù)量較少。而在用EtOH理的HPNE細(xì)胞中，與未處理的HPNE細(xì)胞相比，G1期的細(xì)胞減少，G2和S期的細(xì)胞增加（圖1E）。
????????在乙醇條件的HPNE-KRAS細(xì)胞培養(yǎng)物中觀察到的迅速擴(kuò)大的細(xì)胞群也可能是受細(xì)胞死亡率變化的影響。慢性乙醇處理已被證明能誘導(dǎo)各種非轉(zhuǎn)化細(xì)胞類型，包括β細(xì)胞和T細(xì)胞的Caspase-3激活和凋亡。對照組和EtOH處理的HPNE細(xì)胞之間的caspase-3活性沒有差異。然而，EtOH處理的HPNE-KRAS細(xì)胞在穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)中顯示出caspase-3活性的下降（圖1F）。這些結(jié)果共同表明，細(xì)胞周期的變化和凋亡率的降低導(dǎo)致EtOH處理的HPNE-KRAS細(xì)胞的群體倍增時(shí)間縮短。
02 - 突變體KRAS和乙醇處理會(huì)增加核糖體和RNA代謝基因的表達(dá)
????????對HPNE細(xì)胞系進(jìn)行RNA-Seq分析，以鑒定受KRAS突變和EtOH暴露影響的基因表達(dá)特征，確定了6個(gè)表達(dá)相似的基因簇（圖2A）。與野生型HPNE細(xì)胞相比，在HPNE-KRAS突變體細(xì)胞的背景下，觀察到由于EtOH調(diào)節(jié)導(dǎo)致基因的表達(dá)倍數(shù)變化差異更大（圖2B）。與HPNE細(xì)胞（3105個(gè)轉(zhuǎn)錄本）相比，HPNE-KRAS細(xì)胞還表現(xiàn)出與EtOH處理有關(guān)的更多不同表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本。僅在蛋白質(zhì)編碼基因中，有997個(gè)基因的倍數(shù)變化為2或更大，而728個(gè)基因的倍數(shù)變化為-2或更低。在HPNE EtOH和HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞中，有184個(gè)普遍上調(diào)的基因和179個(gè)普遍下調(diào)的基因（圖2C），表明EtOH調(diào)節(jié)對這些基因的調(diào)控有保守的影響，與KRAS突變狀態(tài)無關(guān)。然而，1635個(gè)上調(diào)和1388個(gè)下調(diào)的基因與HPNE-KRAS細(xì)胞的EtOH處理有獨(dú)特的聯(lián)系，而HPNE細(xì)胞的EtOH調(diào)理則有303個(gè)上調(diào)和280個(gè)下調(diào)的基因（圖2C）。這些結(jié)果共同表明，胰腺細(xì)胞中潛在的KRAS突變可能加劇長期乙醇暴露引起的基因表達(dá)失調(diào)。
????????為了評估這些不同表達(dá)的蛋白編碼基因的共同特征，使用DAVID對HPNE（圖2D,E）和HPNE-KRAS（圖2F,G）細(xì)胞系進(jìn)行了GO富集分析。與HPNE細(xì)胞中EtOH調(diào)節(jié)相關(guān)的上調(diào)基因集富集對應(yīng)于細(xì)胞外區(qū)域和質(zhì)膜組分的細(xì)胞組分（CC），同時(shí)鑒定出用于受體結(jié)合，鈣離子結(jié)合和生長因子活性的富集分子功能（MF）（圖2D）。在HPNE細(xì)胞中與EtOH調(diào)節(jié)相關(guān)的下調(diào)基因中，富集GO項(xiàng)是BP類別中的細(xì)胞表面受體信號傳導(dǎo)，細(xì)胞或亞細(xì)胞組分的運(yùn)動(dòng)以及CC類別中的質(zhì)膜成分（圖2E），類似于在上調(diào)基因集中觀察到的結(jié)果。在EtOH條件的HPNE-KRAS細(xì)胞中，上調(diào)基因在BP類別中靶向質(zhì)膜和ER項(xiàng)的蛋白質(zhì)中富集，CC類別中的核糖體組分項(xiàng)以及MF類別中的rRNA代謝/處理項(xiàng)（圖2F）。在HPNE-KRAS乙醇處理細(xì)胞中下調(diào)的基因在細(xì)胞外基質(zhì)和結(jié)構(gòu)組織以及細(xì)胞 - 細(xì)胞信號傳導(dǎo)（BP）中富集;質(zhì)膜和細(xì)胞外基質(zhì)成分，神經(jīng)元和突觸部分（CC）;鈣離子結(jié)合，受體結(jié)合和活性以及糖胺聚糖結(jié)合（MF）（圖2G）。KRAS突變和EtOH處理對核糖體基因表達(dá)的綜合影響表明，蛋白質(zhì)表達(dá)譜可能受到影響。
03 - 突變的KRAS和乙醇處理增加了核糖體和RNA處理蛋白
????????為了描述EtOH和KRAS突變對HPNE細(xì)胞的蛋白質(zhì)水平的影響，作者使用了定量蛋白質(zhì)組學(xué)，每個(gè)條件有3個(gè)生物重復(fù)。檢測了3861個(gè)蛋白質(zhì)。將每種條件下至少具有3個(gè)重復(fù)值中的2個(gè)的蛋白質(zhì)納入進(jìn)一步分析。在HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞中，共有3167和3210個(gè)蛋白質(zhì)分別符合這些要求（圖3A）。使用主成分分析（PCA）來可視化每個(gè)樣品蛋白質(zhì)組的變化和模式（圖3B）。與未經(jīng)處理的HPNE細(xì)胞相比，EtOH處理對蛋白質(zhì)組的變化影響相對較小。然而，與未經(jīng)處理的HPNE-KRAS對照細(xì)胞相比，突變KRAS表達(dá)背景下EtOH處理對蛋白質(zhì)組的變化有較大影響（圖3B）。與RNA-seq的結(jié)果一樣，與HPNE相比，EtOH處理對HPNE-KRAS細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)差異有較大的影響。在±1.25的倍變閾值和FDR≤0.05來定義差異表達(dá)的蛋白質(zhì)時(shí)，與未處理的HPNE-KRAS細(xì)胞相比，132種蛋白質(zhì)（95種上調(diào)和37種下調(diào)）在HPNE-KRAS EtOH中差異表達(dá)（圖3C）;然而，在HPNE細(xì)胞中沒有蛋白質(zhì)達(dá)到這個(gè)FDR閾值。
????????通過DAVID進(jìn)行GO術(shù)語富集分析，以確定與HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞系中不同表達(dá)的蛋白質(zhì)相關(guān)的重要術(shù)語（圖3D-G）。富含HPNE EtOH上調(diào)蛋白的生物過程（BP）項(xiàng)主要與RNA處理和剪接有關(guān)，細(xì)胞組分（CC）項(xiàng)包括核糖核蛋白和剪接體復(fù)合物，分子功能項(xiàng)（MF）包括參與細(xì)胞 - 細(xì)胞粘附的鈣粘蛋白結(jié)合，以及poly（A）和RNA結(jié)合（圖3D)。在用EtOH處理的HPNE細(xì)胞中，下調(diào)蛋白的首要條件是生物體（BP）細(xì)胞外細(xì)胞器（CC），氧化還原酶和蘇氨酸型內(nèi)肽酶活性（MF）之間的細(xì)胞間相互作用（圖3E）。Poly（A）和RNA結(jié)合也是與下調(diào)蛋白和上調(diào)蛋白相關(guān)的重要術(shù)語。與RNA Seq數(shù)據(jù)一樣，觀察到在HPNE-KRAS EtOH上調(diào)和下調(diào)的蛋白質(zhì)中，所有三個(gè)GO類別都有更多的富集術(shù)語（圖3F,G）。上調(diào)的蛋白質(zhì)富集于蛋白質(zhì)靶向ER和核糖體；與翻譯、rRNA/RNA處理和結(jié)合有關(guān)的功能經(jīng)常出現(xiàn)在GO術(shù)語結(jié)果中（圖3F）。下調(diào)的基因富集在細(xì)胞外結(jié)構(gòu)組織、質(zhì)膜成分和鈣離子結(jié)合方面（圖3G）。
04 - 慢性乙醇調(diào)理后，乙醇代謝受到輕微的影響
????????在高濃度乙醇的條件下，乙醇可以被CYP2E1（細(xì)胞色素P450 2E1）代謝，它產(chǎn)生的ROS是反應(yīng)的副產(chǎn)品，有可能對DNA和蛋白質(zhì)造成損害，從而促進(jìn)癌癥的發(fā)展（圖4A）。因此，作者測量了用EtOH調(diào)理的HPNE和HPNE-KRAS的基線乙醛和ROS水平，與類似的未處理的對照細(xì)胞相比，以及它們對急性EtOH刺激（測量前100mM培養(yǎng)1小時(shí)）的反應(yīng)。雖然急性EtOH刺激增加了乙醛的產(chǎn)生，但在不同的細(xì)胞系之間沒有觀察到乙醛濃度的明顯差異，不管EtOH調(diào)節(jié)狀態(tài)如何（圖4B）。同樣，除了非乙醇處理的HPNE-KRAS細(xì)胞在急性乙醇刺激后表現(xiàn)出ROS水平的增加外，不同的細(xì)胞系之間的ROS水平也沒有急劇變化（圖4C）。乙醛和ROS的產(chǎn)生缺乏明顯的變化，這也反映在蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)中。在蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)中檢測到的與乙醛代謝有關(guān)的大多數(shù)酶在HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞中的表達(dá)水平相似，并且不受乙醛調(diào)節(jié)的影響（圖4D）。例外的是AKR1A1和ALDH1B1，它們分別在EtOH條件的HPNE-KRAS細(xì)胞中下調(diào)或上調(diào)（圖4D）。ALDH1B1和突變KRAS被認(rèn)為與驅(qū)動(dòng)PDAC的開始有關(guān)?？傊@些結(jié)果表明，在HPNE-KRAS細(xì)胞中，與EtOH調(diào)節(jié)有關(guān)的表型變化可能不是由于與EtOH代謝途徑有關(guān)的適應(yīng)性。
05 - 用乙醇處理的突變體KRAS細(xì)胞顯示出RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)之間的相關(guān)性增加
????????進(jìn)行多重共性分析（MCIA）來觀察每個(gè)樣品的RNA-Seq和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)之間的關(guān)系。在HPNE、HPNE EtOH和HPNE-KRAS條件下，RNA-Seq和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)有所不同，如類似條件下數(shù)據(jù)類型點(diǎn)的分離度增加所描繪的（圖5A）。有趣的是，HPNE-KRAS EtOH RNA-Seq和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)表現(xiàn)出高度的相似性，表明這些細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程之間的相關(guān)性增加。
????????使用HPNE-KRAS EtOH數(shù)據(jù)集，作者在RNA-Seq和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)集中鑒定出44種轉(zhuǎn)錄本和蛋白質(zhì)，這些轉(zhuǎn)錄本和蛋白質(zhì)一致地上調(diào)（n = 33）或下調(diào)（n = 11）（圖5B，C）。選擇在增殖過程中具有已知功能的基因/蛋白，包括PRP19、CD81、ZPR1、RUVB1、RHOG和NT5E，通過q-RT-PCR和Western blot分析來驗(yàn)證RNA-Seq和蛋白組學(xué)數(shù)據(jù)（圖5D-I）。CD81（圖5D），RHOG（圖5E），ZPR1（圖5F），RUVBL1（圖5G）和PRPF19（圖5H）的蛋白質(zhì)和mRNA水平在HPNE-KRAS細(xì)胞中響應(yīng)EtOH調(diào)節(jié)而增加，而NT5E（圖5I）mRNA降低，這些細(xì)胞中的蛋白質(zhì)水平僅略微降低。這些結(jié)果與蛋白質(zhì)組學(xué)和RNA-Seq數(shù)據(jù)基本一致（圖5C由基因/蛋白質(zhì)名稱前面的星號表示）。
06 - SERPINE1是EtOH調(diào)理的HPNE-KRAS細(xì)胞中特有的高度相關(guān)的蛋白質(zhì)
????????為了確定蛋白質(zhì)之間潛在的重要調(diào)節(jié)關(guān)系，作者進(jìn)行了差異化的共表達(dá)分析，重點(diǎn)關(guān)注EtOH條件下的HPNE-KRAS。確定了哪些蛋白質(zhì)被共同表達(dá)，以及在突變體KRAS表達(dá)和EtOH處理的情況下共同表達(dá)如何變化?？偣泊_定了287種具有561個(gè)正或負(fù)相關(guān)的蛋白質(zhì)（圖6A）。在許多情況下，在HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了具有正相關(guān)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)對，但在HPNE、HPNE EtOH和HPNE-KRAS細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)這些相同的蛋白質(zhì)對是負(fù)相關(guān)的或不相關(guān)的。同樣，在HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞中表現(xiàn)出負(fù)相關(guān)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)對，在HPNE、HPNE EtOH和HPNE-KRAS細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)正相關(guān)或不相關(guān)。
????????有幾個(gè)高度相關(guān)的蛋白質(zhì)在組合網(wǎng)絡(luò)中被確定為負(fù)相關(guān)和正相關(guān)，包括纖溶酶原激活物抑制劑1（PAI1，又名SERPINE1）（圖6B,C）。SERPINE1是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，被大多數(shù)人類癌細(xì)胞系過度表達(dá)，被認(rèn)為通過細(xì)胞周期進(jìn)展刺激生長，并通過激活蛋白酶活化受體（PAR）間接刺激生長。根據(jù)Fisher's Exact Score，確定了與SERPINE1有正相關(guān)或負(fù)相關(guān)的蛋白質(zhì)的前五個(gè)GO/KEGG通路術(shù)語（圖6C）。與 SERPINE1 正相關(guān)網(wǎng)絡(luò)蛋白相關(guān)的最重要的術(shù)語之一是“酗酒”。SERPINE1負(fù)相關(guān)網(wǎng)絡(luò)的另一個(gè)重要術(shù)語是 "丙酮酸代謝過程"（圖6C）。乙醇分解和丙酮酸鹽均產(chǎn)生乙酰輔酶A，丙酮酸隨乙醇暴露而降低。SERPINE1的差異共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)表明該蛋白可以作為調(diào)節(jié)胰腺細(xì)胞對乙醇暴露反應(yīng)的 "樞紐 "蛋白。事實(shí)上，來自PDAC患者的TCGA數(shù)據(jù)對酒精攝入頻率的注釋表明，SERPINE1蛋白的表達(dá)與酒精使用頻率的增加呈負(fù)相關(guān)（圖6D）。同樣，蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)顯示，與未經(jīng)處理的HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞相比，SERPINE1的表達(dá)明顯下降（圖6E）。此外，SERPINE1的低表達(dá)與PDAC患者的明顯生存優(yōu)勢有關(guān)（圖6F）?？傊@些結(jié)果表明，SERPINE1是HPNE-KRAS細(xì)胞中受酒精暴露調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)高度互連的節(jié)點(diǎn)，這可能對患者的生存有影響。
07 -乙醇處理改變了 PDAC 亞型
????????先前在轉(zhuǎn)移性PDAC組織中的蛋白質(zhì)組學(xué)觀察表明，這些患者的酒精使用與炎癥亞型的減少以及增殖性和代謝亞型的增加有關(guān)。為了確定在HPNE細(xì)胞系中存在或不存在突變的KRAS時(shí)，EtOH對亞型特征的影響，作者評估了具有或不具有EtOH調(diào)節(jié)的每種HPNE和HPNE-KRAS細(xì)胞系的PDAC亞型特征（圖7A-D）。EtOH對HPNE細(xì)胞的亞型特征沒有明顯影響。然而，HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞的增殖性（圖7A）和代謝性（圖7C）亞型特征明顯增加，炎癥性亞型特征明顯減少（圖7B）。值得注意的是，在HPNE-KRAS細(xì)胞中，對EtOH調(diào)理反應(yīng)的亞型特征的變化最明顯的是炎癥性特征的抑制和代謝性特征的增加（圖7B，C）。表明EtOH對PDAC亞型發(fā)展的影響可能取決于KRAS的突變狀態(tài)。
????????此外，以前的研究確定，對FOLFIRINOX療法的臨床反應(yīng)也與PDAC亞型有關(guān)。由于對EtOH調(diào)理的亞型特征的轉(zhuǎn)變也可能影響對治療藥物的反應(yīng)，作者分析了三種常用的胰腺癌藥物（吉西他濱、伊立替康和奧沙利鉑）對細(xì)胞活力的影響（圖7E-G）。與對照組HPNE細(xì)胞相比，EtOH處理HPNE細(xì)胞導(dǎo)致吉西他濱處理的EC50較低，但在該細(xì)胞系中沒有觀察到伊立替康或奧沙利鉑處理對EC50的影響。然而，與對照組HPNE-KRAS細(xì)胞相比，吉西他濱（圖7E）、伊立替康（圖7F）和奧沙利鉑（圖7G）的EC50s在HPNE-KRAS EtOH細(xì)胞中明顯降低。這些結(jié)果與預(yù)期一致，即隨著細(xì)胞獲得代謝特征并失去炎癥特征，治療反應(yīng)將得到改善。
四、結(jié)論
????????這項(xiàng)研究確定，酒精優(yōu)先誘導(dǎo)和增加表達(dá)突變KRAS的胰腺HPNE細(xì)胞的增殖潛力。研究表明，酒精對胰腺細(xì)胞的影響取決于細(xì)胞的KRAS突變狀態(tài)。結(jié)合起來，酒精和突變的KRAS會(huì)增強(qiáng)增殖表型，并影響與轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的改變相關(guān)的亞型劃分。
