基因敲除后基因型的驗證之單克隆制備與測序

胚胎進行CRISPR/Cas9敲除之后需要對突變體進行基因型的鑒定。
大致如下：
首先，提取突變體的DNA；
再進行PCR得到sgRNA區(qū)間的條帶，并觀察是否有引物二聚體或條帶單一；
隨后將PCR產(chǎn)物連接載體質(zhì)粒；
再將連接好的產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞大腸桿菌；
搖床培養(yǎng)后進行涂板/劃平板；
挑單克隆菌株；
做PCR；
再進行測序；

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