Neuro-2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞)培養(yǎng)教程

細(xì)胞名稱: Neuro-2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞)

細(xì)胞別稱: NEURO-2A;Neuro2a;Neuro2a;Neuro2A;N-2a;N2a;N2A;Nb2a;NB2a

細(xì)胞貨號: SNL-134

生長特性: 貼壁

培養(yǎng)條件: EMEM(MEM+NEAA)+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境: 37℃;5% CO2;飽和濕度

細(xì)胞簡介: Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞是由R·J·Klebe和F·H·Ruddle自A/J小鼠大腦組織自生腫瘤建立的具有神經(jīng)元和變形干細(xì)胞形態(tài)的小鼠成神經(jīng)細(xì)胞。Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞產(chǎn)生大量微管蛋白,此蛋白在神經(jīng)細(xì)胞中起應(yīng)答軸漿流動的收縮系統(tǒng)作用,細(xì)胞也表達(dá)乙酰膽堿酯酶基因。Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞能夠分化成各種類型的神經(jīng)元。Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、高通量篩選、神經(jīng)科學(xué)研究、毒理學(xué)研究。Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞已用于研究長春堿沉淀微管蛋白的機制、GTP與分離蛋白結(jié)合的動力學(xué)、體內(nèi)微管的周轉(zhuǎn)以及微管蛋白合成和組裝。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將這些細(xì)胞用于狂犬病的常規(guī)診斷。Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]細(xì)胞經(jīng)檢測鼠痘病毒呈陰性。

Neuro-2a細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

1. 混合形態(tài)

Neuro-2a細(xì)胞為圓形細(xì)胞和帶觸角的多角形細(xì)胞的混合形態(tài),同時存在部分漂浮細(xì)胞。

2. 存在漂浮細(xì)胞

Neuro-2a細(xì)胞貼壁松散,培養(yǎng)過程中存在30%~50%的漂浮細(xì)胞。換液及傳代前,培養(yǎng)基需要提前預(yù)熱,避免更多細(xì)胞漂浮。

換液和傳代要離心收集漂浮細(xì)胞并與原來的細(xì)胞混合繼續(xù)培養(yǎng)。不要丟棄漂浮細(xì)胞,否則細(xì)胞密度會越來越低,最終導(dǎo)致細(xì)胞不增殖。

3.細(xì)胞貼壁較慢

Neuro-2a細(xì)胞剛接種48小時大部分細(xì)胞是未展開的、呈圓形貼壁。72小時后細(xì)胞逐漸鋪展,部分細(xì)胞形成觸角。

4.生長速度較慢

Neuro-2a細(xì)胞生長較慢,1:2傳代周期為3-5天。注意控制細(xì)胞密度不要過低,接種密度太低細(xì)胞增殖速度會減慢或停止增殖,推薦傳代比例1:2。(注意T25培養(yǎng)瓶底面積為25cm2,10cm培養(yǎng)皿底面積是55cm2,一個T25傳兩個10cm皿約等于1:4傳代,而非1:2)。

5.難以完全匯合至100%

Neuro-2a細(xì)胞容易聚集堆疊生長,視覺上難以長滿,實際細(xì)胞密度比觀察密度要大。生長至下圖所示密度可以傳代。

▲ Neuro-2a傳代密度示例

6.細(xì)胞碎片較多

Neuro-2a細(xì)胞的觸角在消化時易斷裂形成碎片,所以培養(yǎng)時存在一些黑點,但不影響細(xì)胞生長。黑點較多時可以通過PBS潤洗并換液清除。

7.不建議使用DMEM

不建議使用高糖DMEM培養(yǎng),可能會導(dǎo)致部分細(xì)胞形態(tài)改變,生長速度變慢

8.對血清要求高

建議使用高品質(zhì)的、并確認(rèn)過培養(yǎng)效果的專用培養(yǎng)基及血清,血清品質(zhì)對該細(xì)胞生長影響甚大。

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