?????? 從細(xì)胞或組織中提取核酸進(jìn)行分子生物學(xué)研究或基因檢測(cè)已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷以及科學(xué)研究的一種重要手段。原理不必多說(shuō)，做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都知道，那就是將細(xì)胞膜破裂，變性膜蛋白以及核蛋白，釋放出核酸，然后再將核酸提取純化出來(lái)。

?????? 眾所周知，細(xì)胞、組織DNA提取的主流方法主要有磁珠法和離心柱法。關(guān)于這兩種方法的優(yōu)劣想必大家在很多資料中已經(jīng)有所了解，磁珠法針對(duì)大批量樣本，可自動(dòng)化作業(yè)，但提取的DNA純度低，得率也較低，而且容易引發(fā)交叉污染，導(dǎo)致假陰性檢測(cè)結(jié)果；離心柱法適合手動(dòng)提取或半自動(dòng)化提取，工作效率低一些，但提取的DNA純度較高，得率也較高。

???????如果樣本不是太多或者樣本比較珍貴，而且實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA提取結(jié)果要求比較高，個(gè)人建議最好采用離心柱法。那么，面對(duì)種類(lèi)繁多的離心柱法試劑盒，我們應(yīng)該如何選擇？接下來(lái)我們就看一下有哪些因素需要考慮。

?????? ?一、較高的DNA提取得率。對(duì)離心柱法而言，細(xì)胞DNA提取得率的高低主要取決于離心柱對(duì)核酸的吸附能力、洗脫能力以及裂解液的裂解消化能力。離心柱的硅膠膜DNA吸附性能好、裂解液裂解能力強(qiáng)、洗脫液洗脫能力好，核酸的提取得率就高。反之，DNA的提取得率就不高。我們可以采用紫外分光光度法進(jìn)行DNA提取得率的測(cè)定，但是不能作為判斷得率的唯一標(biāo)準(zhǔn)，最好還是要做個(gè)PCR或熒光定量。細(xì)胞數(shù)量與提取的核酸量成正比，如果要提高核酸得率，可通過(guò)增加細(xì)胞量來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般先提取105-106的細(xì)胞量（最好不超過(guò)107 Cell，可用細(xì)胞計(jì)數(shù)方法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)），如結(jié)果不理想可考慮增加細(xì)胞量。但如果增加細(xì)胞量還不能得到滿意結(jié)果，應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的細(xì)胞DNA提取試劑有國(guó)外品牌Q，國(guó)產(chǎn)品牌Biog和T等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，Q細(xì)胞DNA的提取得率，一般107細(xì)胞樣本在40-60ug。Biog與Q公司的DNA提取得率相近，106-107細(xì)胞樣本在30-60ug；T公司 106-107細(xì)胞樣本DNA得率在20-50ug，都能滿足下游PCR實(shí)驗(yàn)的要求。

????? ?二、DNA提取純度高。我們一般采用紫外分光光度法測(cè)定OD260/OD280比值來(lái)估計(jì)核酸純度。一般DNA 溶液OD260/OD280比值應(yīng)在1.6--1.8之間，如果提取的DNA溶液該比值小于1.6，通常說(shuō)明有蛋白質(zhì)或酚、多糖等的污染。如果提取的DNA溶液該比值大于1.9，則表明有RNA污染。不同品牌的試劑盒提取的DNA純度略有差別，國(guó)產(chǎn)試劑盒Biog和T的DNA提取純度差不多，都可以直接應(yīng)用于基因檢測(cè)、PCR、qPCR、分子雜交等。Q的純度略高，一般在1.7-1.9，除了以上應(yīng)用，還可用于對(duì)純度要求略高的實(shí)驗(yàn)，如二代測(cè)序等。

?????? ?三、產(chǎn)品價(jià)格。市面上的試劑盒價(jià)格參差不齊，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)費(fèi)情況也不盡相同，所以?xún)r(jià)格也是客戶選購(gòu)產(chǎn)品的重要因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如PCR、qPCR、基因檢測(cè)、分子雜交等，國(guó)產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求。與國(guó)外知名品牌相比，國(guó)產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜，一般只有國(guó)外品牌價(jià)格的30%，性?xún)r(jià)比較高。因而，對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用Biog、T等國(guó)產(chǎn)試劑盒。對(duì)于經(jīng)費(fèi)不多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目，建議選用國(guó)產(chǎn)試劑盒。對(duì)提取DNA的純度要求相對(duì)較高的研究如直接測(cè)序，細(xì)胞轉(zhuǎn)染等，則可考慮Q等國(guó)外知名品牌。

????????綜上三點(diǎn)，與國(guó)外知名品牌相比，國(guó)產(chǎn)試劑盒在細(xì)胞DNA提取純度上略有不足，但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn)，特別是下游PCR擴(kuò)增以及分子雜交類(lèi)實(shí)驗(yàn)；在DNA提取得率上，國(guó)內(nèi)試劑盒與國(guó)外品牌差別不大；而在價(jià)格方面，國(guó)產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)。如果經(jīng)費(fèi)充足，DNA純度要求較高，可考慮選擇Qiagen等國(guó)外知名品牌。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游做PCR、qPCR、分子雜交等實(shí)驗(yàn)，可考慮選擇性?xún)r(jià)比較高的Biog等國(guó)產(chǎn)品牌。