實(shí)驗(yàn)室里最磨人的，往往不是那些宏大的科學(xué)命題，而是手邊那個(gè)怎么也做不出來(lái)的抗體。
做WB的時(shí)候，目標(biāo)條帶若隱若現(xiàn)，非特異性條帶倒是一大片。做IHC的時(shí)候，陽(yáng)性信號(hào)該亮的地方?jīng)]亮，不該亮的地方全亮了。隔壁師兄安慰你：多抗嘛，背景高一點(diǎn)正常，湊合用唄。
可你心里清楚——實(shí)驗(yàn)不能湊合，數(shù)據(jù)更不能湊合。
多抗的“通融”，是一種難得的智慧
單克隆抗體像狙擊槍，精準(zhǔn)，專一，指哪打哪。而多克隆抗體更像一個(gè)有經(jīng)驗(yàn)的偵察兵——它認(rèn)得目標(biāo)的多個(gè)面孔，哪怕對(duì)方換了裝束、藏了身形，它也能從不同角度把它認(rèn)出來(lái)。
這正是兔多抗不可替代的地方。
有些靶點(diǎn)蛋白，表達(dá)量低得可憐，單抗根本夠不著。有些抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，單一表位的識(shí)別往往漏掉關(guān)鍵信息。還有些時(shí)候，你需要在變性與非變性的不同條件下檢測(cè)同一個(gè)蛋白——這時(shí)候，能識(shí)別多個(gè)表位的多抗，就顯出了它的“通融”。
優(yōu)品生物的兔多抗制備平臺(tái)，做的就是把這種“通融”變成一種可靠的、可重復(fù)的科學(xué)工具。
那些藏在流程里的講究
多抗制備這件事，門檻其實(shí)不高。免疫兔子、采血、純化，按部就班走下來(lái)，總能拿到點(diǎn)東西。但“拿到”和“好用”之間，隔著無(wú)數(shù)個(gè)細(xì)節(jié)。
優(yōu)品生物的抗原設(shè)計(jì)，從來(lái)不是走流程。
遇到難表達(dá)的重組蛋白，他們會(huì)嘗試七八種表達(dá)載體、換三四株表達(dá)菌，實(shí)在不行就改策略——合成多肽，偶聯(lián)KLH，選那些免疫原性最強(qiáng)的表位。每一條多肽出來(lái)，都得過(guò)HPLC，純度不到95%以上，不上兔子。-1
兔子的品系選的是新西蘭白，SPF級(jí)，養(yǎng)在恒溫恒濕的環(huán)境里。初次免疫用弗氏完全佐劑，加強(qiáng)免疫換不完全佐劑，皮下多點(diǎn)注射，讓抗原和免疫系統(tǒng)充分接觸。-2免疫期間，每隔一兩周采一次血測(cè)效價(jià)，ELISA讀板的時(shí)候，技術(shù)員盯著那排吸光度值，心里有桿秤——效價(jià)不到1:10^5，絕不往下走。
華中科技大學(xué)的一位老師，送來(lái)一個(gè)特別刁鉆的靶點(diǎn)——膜蛋白跨膜區(qū)，疏水性極強(qiáng)，跑了三家公司的預(yù)實(shí)驗(yàn)都沒(méi)成。優(yōu)品生物的抗原設(shè)計(jì)組坐下來(lái)開(kāi)了兩次會(huì)，最后決定用去垢劑增溶重組蛋白，配合特定佐劑，硬是把免疫原性提了上去。拿到抗體那天，老師在微信上發(fā)來(lái)一句話：“你們是真敢接，也是真能做出來(lái)?！?/p>
純化這一步，決定了背景的干凈程度
粗抗血清里，除了目標(biāo)抗體，還有成千上萬(wàn)種雜蛋白。把它們分干凈，是一門手藝。
優(yōu)品生物的純化平臺(tái)，走兩條路。Protein A/G親和層析，先抓總IgG，把大部分雜蛋白去掉。抗原親和純化，再用你那個(gè)靶點(diǎn)蛋白做配基，把能認(rèn)它的抗體單獨(dú)“釣”出來(lái)。-1兩條路走完，跑出來(lái)的SDS-PAGE膠，還原條件下重鏈輕鏈清清爽爽，非還原條件下就一條主帶。
沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)的用戶，用優(yōu)品生物的多抗做Western Blot，第一次跑出來(lái)的條帶就干凈得像教科書(shū)配圖。他在反饋里寫(xiě)：“背景幾乎沒(méi)有，信號(hào)強(qiáng)，重復(fù)了三次都一樣?！?span>-9
這種反饋，技術(shù)人員看了，心里踏實(shí)。
驗(yàn)證，是對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最大的尊重
抗體做出來(lái)，不是終點(diǎn)。真正見(jiàn)真章的地方，是它能陪你走多遠(yuǎn)。
優(yōu)品生物的QC流程，不走過(guò)場(chǎng)。ELISA測(cè)效價(jià)，滴定曲線做下來(lái)，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)得達(dá)標(biāo)。Western Blot驗(yàn)證，細(xì)胞裂解液上樣，轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育、曝光，走完一整輪，看條帶位置對(duì)不對(duì)，背景干不干凈。免疫組化，石蠟切片、抗原修復(fù)、DAB顯色，陽(yáng)性信號(hào)得在它該在的地方亮起來(lái)。-1
四川大學(xué)的老師做Collagen I，需要抗體能同時(shí)用于WB和IHC。優(yōu)品生物的驗(yàn)證報(bào)告里，兩張圖并排放著——一張條帶整齊，一張陽(yáng)性細(xì)胞染得恰到好處。老師看了，只說(shuō)了一句：“這就是我想要的。”-9
速度與穩(wěn)妥，總得有人兼顧
做科研的人，沒(méi)有不著急的。課題進(jìn)度擺在那兒，論文deadline也擺在那兒。等抗體那幾個(gè)月，有時(shí)候比做實(shí)驗(yàn)還煎熬。
優(yōu)品生物的多抗制備周期，常規(guī)走下來(lái)八到十二周。-2抗原設(shè)計(jì)一兩周，免疫五六周，采血純化兩三周，驗(yàn)證再一兩周。時(shí)間表排得緊，但每一步都不打折。
南方醫(yī)科大學(xué)用優(yōu)品生物的試劑盒做ELISA，反饋里寫(xiě)：“操作簡(jiǎn)單，結(jié)果精準(zhǔn)，技術(shù)支持響應(yīng)快?！?span>-9這種評(píng)價(jià)，背后是無(wú)數(shù)個(gè)準(zhǔn)時(shí)交付的項(xiàng)目堆出來(lái)的。
那些沒(méi)有寫(xiě)在報(bào)告里的東西
優(yōu)品生物的實(shí)驗(yàn)室里，掛著一塊白板，上面密密麻麻記著各種實(shí)驗(yàn)方案的討論、技術(shù)難點(diǎn)的拆解、客戶問(wèn)題的跟進(jìn)。旁邊那張沙發(fā)，經(jīng)常有技術(shù)員窩在那兒翻文獻(xiàn)、寫(xiě)方案。
這種氛圍，決定了他們和客戶的溝通方式。
有客戶打電話來(lái)問(wèn)，我的多抗做免疫熒光背景高怎么辦。技術(shù)員不會(huì)說(shuō)“你回去調(diào)一下封閉條件”，而是會(huì)問(wèn)：你用的固定劑是什么？通透時(shí)間多長(zhǎng)？二抗是哪家的？稀釋比例多少？——這種問(wèn)法，才像并肩作戰(zhàn)的伙伴。
北京協(xié)和的老師，做完實(shí)驗(yàn)發(fā)了張圖過(guò)來(lái)，條帶跑得漂亮，附了一句話：“結(jié)果漂亮，謝謝?！?span>-9簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單幾個(gè)字，抵得過(guò)一萬(wàn)句客套話。
微觀世界里，總得有幾個(gè)靠得住的存在
多抗這東西，說(shuō)到底是個(gè)工具。但它又不僅僅是工具。
它幫你驗(yàn)證那個(gè)你追了好久的假設(shè)，幫你把藏在細(xì)胞深處的蛋白標(biāo)記出來(lái)，幫你在審稿人面前把數(shù)據(jù)講清楚。它的可靠性，直接影響你這一年多的心血能不能變成一篇好文章，能不能成為下一個(gè)研究的起點(diǎn)。
優(yōu)品生物的兔多抗制備平臺(tái)，做的就是把這份“可靠性”，變成一種可以預(yù)期的結(jié)果。
從抗原設(shè)計(jì)到免疫方案，從純化工藝到驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，每一步都有講究。這些講究，懂的人自然懂——那些實(shí)驗(yàn)室里熬過(guò)的夜，那些跑壞的膠，那些終于出現(xiàn)的條帶，都知道。
成都的老師說(shuō)得特別好：“抗體效果好，實(shí)驗(yàn)零失敗?！?span>-9
六個(gè)字，是給優(yōu)品生物最好的注腳。
