1. 雙脫氧核苷酸（ddNTP）

缺少3'位的羥基的ddNTP結(jié)合到DNA鏈上，會(huì)使得后面的單脫氧核苷酸（dNTP）無法再聚合上來，致使聚合反應(yīng)終止。

二、測序介紹

第一步：加入bigdye試劑（包含四種帶熒光標(biāo)記的ddNTP、四種dNTP、DNA聚合酶、鎂離子、ph緩沖液等。）進(jìn)行聚合反應(yīng)。

在進(jìn)行聚合反應(yīng)時(shí)，有可能結(jié)合上ddNTP且終止反應(yīng)，也有可能結(jié)合上正常dNTP正常反應(yīng)，直到結(jié)合上ddNTP終止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束生成長短不一的含有熒光標(biāo)記的DNA片段混合物（熒光顏色（代表的堿基）與模板的堿基有互補(bǔ)對(duì)應(yīng)的關(guān)系）。

第二步： 過濾混合物，去除ddNTP等其他雜質(zhì)，只留下長短不一的DNA片段。

第三步：上機(jī)測序

1）先在長長的中空的玻璃毛細(xì)管中注入丙烯酰胺溶液，用紫外光照射丙烯酰胺溶液發(fā)生聚合反應(yīng)變成聚丙烯酰胺凝膠。

聚丙烯酰胺凝膠對(duì)于在其中電泳的核酸有分離作用,短的片段在其中電泳得快，長的片段在其中電泳的慢。

2）把DNA片段混合物，加到有聚丙烯酰胺凝膠的毛細(xì)管的一段，在毛細(xì)管的兩端加上高電壓，DNA片段就在電場的作用下，從負(fù)極向正極電泳。

3）在毛細(xì)管正極的末端，用激光進(jìn)行照射，并用分光的光學(xué)傳感器把不同顏色的熒光強(qiáng)度記錄下來。每個(gè)DNA片段在經(jīng)過激光點(diǎn)掃描時(shí)，它上面帶有的熒光基團(tuán)就會(huì)發(fā)出特定顏色的熒光。

出處：

作者：看遠(yuǎn)方的星

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