板塊“與實(shí)驗(yàn)結(jié)緣”代號(hào)“Destiny”（命運(yùn)）主要想與大家聊聊，科研實(shí)驗(yàn)中的那些事兒。
密度梯度離心是一種簡單、快速分離細(xì)胞的方法，原理是用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。
大家搜密度梯度離心介質(zhì)時(shí)候，會(huì)發(fā)現(xiàn)有兩種產(chǎn)品：Ficoll還有Percoll。名字這么相似，作用一樣嗎？他倆有什么區(qū)別呢？我應(yīng)該怎么選擇呢？
先別頭大，小編先用一句話，形容一下這兩個(gè)試劑：Ficoll是多能的，但Percoll是全能的！下面詳細(xì)說說這兩個(gè)試劑。
Ficoll
Ficoll密度梯度離心法是分離、純化外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）最常用的方法。
PBMC包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（圖1），由于其體積、形狀和比重與其他細(xì)胞不同，可以使用密度在 1.077±0.001 g/ml 之間的Ficoll溶液作為密度梯度離心介質(zhì)將它與其他細(xì)胞分離開。
使用Ficoll溶液將血液離心分層后，各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集，血漿（Plasma）和血小板由于密度較低, 故懸浮于分層液的上部；PBMC 密度稍低于分層液，故位于分層液界面上形成白膜層；紅細(xì)胞（RBCs）與粒細(xì)胞（Granulocytes）由于密度較大, 故沉于分層液的底部（圖2右）。
Ficoll是蔗糖的多聚體，一般實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常用的是Ficoll-Paque，不同型號(hào)及對(duì)應(yīng)的應(yīng)用方向請(qǐng)見下表：
需要注意以下幾點(diǎn)
1、 人的PBMC分離，可以選擇Ficoll-Paque Plus（1.077），入股不虧；但是小鼠PBMC分離建議購買Ficoll-Paque PREMIUM（1.084）哦，因?yàn)樗麄兠芏炔灰粯印?/p>
2、 雖然網(wǎng)絡(luò)上密度梯度離心sop滿天飛，但是使用的時(shí)候，還是希望大家多多翻閱文獻(xiàn)、認(rèn)真閱讀試劑說明書，進(jìn)一步摸索對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)的最佳使用條件。不要想當(dāng)然，因?yàn)槟銜?huì)發(fā)現(xiàn)當(dāng)你使用Ficoll 4?C離心人外周血時(shí)，獲得的PBMC里有很多紅細(xì)胞污染（！??！ 注意離心溫度在 18-20℃，溫度較低時(shí)，F(xiàn)icoll的密度較大，紅細(xì)胞凝集較少，粒細(xì)胞和紅細(xì)胞會(huì)因?yàn)楸蛔柚惯M(jìn)入Ficoll層而導(dǎo)致污染）。
Percoll
Percoll由聚乙烯吡咯烷酮(PVP)包被的硅膠顆粒組成，它具有易成等滲、粘度低、無毒性、不引起細(xì)胞聚集等優(yōu)點(diǎn)，已得到廣泛引用。
Percoll Plus是共價(jià)偶聯(lián)烷硅涂層硅膠，性質(zhì)更加穩(wěn)定，內(nèi)毒素含量較低，有法規(guī)文件支持，可以用于臨床研究；Percoll 僅能用于科研。
為什么說Percoll是全能的呢？因?yàn)樗膽?yīng)用范圍較廣，不僅僅適于分離不同密度的細(xì)胞，還可分離亞細(xì)胞器和病毒，可實(shí)現(xiàn)從1.02-1.3 g/ml范圍內(nèi)的密度梯度離心分離（Ficoll僅有3個(gè)固定密度），下表中有一些細(xì)胞浮力密度可供參考。
下面提升難度，需要你轉(zhuǎn)動(dòng)自己聰明的小腦袋！既然說到Percoll可以有多個(gè)密度，那么我們應(yīng)該怎么配置Percoll溶液呢？
百分比稀釋法
首先配制母液（SIP），密度為1.123g/ml，體積配比為1.5M NaCl（或者2.5M蔗糖）：Percoll原液=1 : 9。再按照百分比使用0.15M的NaCl（或者0.25M的蔗糖）進(jìn)行配置。計(jì)算公式為：
一步稀釋法
在量筒中加入1/10最終稀釋液體積的1.5M NaCl（或2.5M 蔗糖），之后按照下方公式計(jì)算所需Percoll原液體積，最后使用蒸餾水補(bǔ)齊剩余體積（=終體積 - 1.5M NaCl 體積 - Percoll原液體積）。
童鞋們，你們選對(duì)試劑了嗎？
關(guān)注+轉(zhuǎn)發(fā)，我們下期再見啦～
