細(xì)胞Ki67染色，應(yīng)該是核定位蛋白，卻總是染色到胞質(zhì)，嘗試過很多方法，包括抗體稀釋液全部用0.3%TritonX-100,未做封閉，延長4度條件下一抗孵育時(shí)間至48h，改用37度水浴孵育一抗....還是沒有明顯的改善，不知道怎么該處理。
現(xiàn)附上目前實(shí)驗(yàn)的步驟：
1、細(xì)胞用PBS清洗
2、4%多聚甲醛室溫固定10min
3、PBS清洗5min3次
4、0.3%TritonX-100室溫破膜30min
5、吸去多余的破膜液，孵一抗4度過夜（一抗是用0.3%TritonX-100稀釋，Santa Cruz公司Ki67，1：200）
6、PBS清洗5min3次
7、0.3%TritonX-100稀釋二抗，室溫孵育2h
8、復(fù)染DAPI
9、PBS清洗5min*3次
10、甘油封片

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