一、產(chǎn)品概述
本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)人WDR5（WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白5）的兔多克隆抗體（貨號(hào)：A302-429A）。該抗體特異性識(shí)別WDR5蛋白第1–50位氨基酸之間的N端表位，經(jīng)抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯(lián)標(biāo)記物。已驗(yàn)證反應(yīng)種屬為人，推薦應(yīng)用于免疫組織化學(xué)（IHC）及免疫沉淀（IP）。
WDR5是組蛋白H3賴氨酸4甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物（MLL和SET1復(fù)合物）的核心亞基，通過介導(dǎo)蛋白質(zhì)相互作用參與染色質(zhì)修飾與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。可靠的特異性抗體對(duì)于研究表觀遺傳調(diào)控機(jī)制及藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證具有重要意義。
二、詳細(xì)規(guī)格參數(shù)
參數(shù)?| 信息
靶標(biāo)?| WDR5（WD repeat domain 5）
反應(yīng)種屬?| 人
應(yīng)用?| IHC, IP
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第1–50位氨基酸之間的區(qū)域
亞型?| IgG
偶聯(lián)物?| 未偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
免疫原種屬?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
存儲(chǔ)條件?| 2–8 °C
有效期?| 收貨后1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉
三、抗原表位與生產(chǎn)信息
該抗體識(shí)別的人WDR5表位位于第1–50殘基之間的N端區(qū)域，參考序列號(hào)為NP_060058.1（GeneID 11091）。免疫原對(duì)應(yīng)此N端區(qū)段。
純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，僅富集針對(duì)該N端表位的高親和力IgG分子，有效降低非特異性背景。由于WDR5含有7個(gè)WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域（該結(jié)構(gòu)域在多種蛋白質(zhì)中保守），選擇N端獨(dú)特區(qū)域作為免疫原顯著減少了與其它WD重復(fù)蛋白的交叉反應(yīng)。
免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處的吸光度為1.4）。
四、應(yīng)用方法與推薦條件
4.1 免疫組織化學(xué)（IHC）
推薦稀釋比：1:500 至 1:2000
抗原修復(fù)：建議使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)表位修復(fù)（HIER）?？刹捎酶邏哄伝蛭⒉訜岱?，確保修復(fù)溫度達(dá)到95–100°C持續(xù)10–20分鐘。
樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人組織切片。
檢測步驟建議：
1. 脫蠟水化后，使用3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
2. 抗原修復(fù)后，以5%正常山羊血清封閉30分鐘。
3. 一抗4°C孵育過夜或室溫孵育1–2小時(shí)。
4. 使用HRP標(biāo)記的二抗及DAB顯色系統(tǒng)檢測。
對(duì)照設(shè)置：
陽性對(duì)照：推薦使用已知WDR5高表達(dá)的人組織（如睪丸、胚胎腎或多種癌細(xì)胞系來源的組織芯片）。
陰性對(duì)照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗。
4.2 免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 蛋白裂解液
根據(jù)抗體濃度1000 μg/ml換算，6 μg對(duì)應(yīng)6 μl抗體。操作流程如下：
1. 裂解細(xì)胞：使用非變性裂解緩沖液（如含0.5% NP-40的TBS或PBS，添加蛋白酶抑制劑）。
2. 預(yù)清除：裂解液與10 μl蛋白A/G瓊脂糖珠及1 μg同型IgG孵育1小時(shí)，離心去除非特異性結(jié)合物。
3. 免疫沉淀：預(yù)清除后的上清中加入6 μg A302-429A抗體，4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時(shí)或過夜。
4. 捕獲：加入20–30 μl蛋白A/G珠，繼續(xù)孵育1–2小時(shí)。
5. 洗滌：使用裂解緩沖液洗滌珠子3–5次。
6. 洗脫：加入2× SDS上樣緩沖液，煮沸5分鐘，離心后取上清進(jìn)行WB檢測。
WB檢測IP產(chǎn)物的特殊注意事項(xiàng)：
生產(chǎn)說明書指出，免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot檢測應(yīng)使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）。這一措施避免二抗與IP一抗的重鏈（約55 kDa）結(jié)合產(chǎn)生干擾條帶，確保清晰檢測目標(biāo)蛋白（WDR5分子量約36 kDa）。
4.3 關(guān)于Western Blot的說明
雖然產(chǎn)品說明書中包含WB通用操作描述（5%牛奶-TBST，一抗過夜），但該抗體在應(yīng)用的官方列表中僅包含IHC和IP。用戶若嘗試用于WB，需自行驗(yàn)證。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，WDR5分子量約36 kDa，若需WB檢測，建議從1:500稀釋比開始，并設(shè)置過表達(dá)或敲低樣本作為對(duì)照。
五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
未稀釋抗體必須儲(chǔ)存于2–8°C，嚴(yán)禁冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。
緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。若用于IHC或IP，疊氮化鈉不影響實(shí)驗(yàn)，但若需將IP產(chǎn)物用于后續(xù)質(zhì)譜或細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，建議通過脫鹽柱去除。分裝建議：無需分裝，直接使用原液即可；若頻繁取用，確保操作無菌。
