?在全球范圍內(nèi)，肝硬化仍是威脅人類健康的 “隱形殺手”—— 它由慢性肝病逐步發(fā)展而來，最終可能導(dǎo)致肝衰竭或肝癌，而當(dāng)前唯一的根治手段肝移植，卻受限于供體短缺和手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。不過，近期發(fā)表在《Cell Discovery》上的一項(xiàng)研究，為肝硬化治療帶來了新希望：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院夏強(qiáng)院士與鄢和新教授團(tuán)隊(duì)通過化學(xué)重編程技術(shù)將人類原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化為可擴(kuò)增的肝前體細(xì)胞（HepLPCs），揭示了其安全治療肝硬化的核心機(jī)制。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與部分生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析工作由紐科生物完成。
? ? ? 原文：Treatment of liver cirrhosis using hepatocyte-derived?liver progenitor-like cells: a prospective, open-label, single-arm, safety trial
一、研究背景：肝硬化治療的困境與突破
肝硬化的核心難題在于 “肝細(xì)胞大量受損 + 肝纖維化難以逆轉(zhuǎn)”，傳統(tǒng)細(xì)胞治療要么面臨倫理爭議（如胎兒肝細(xì)胞），要么存在療效不穩(wěn)定問題（如間充質(zhì)干細(xì)胞）。而本次研究的主角——HepLPCs，恰好避開了這些短板：它由人類原代肝細(xì)胞重編程而來，既無需依賴倫理敏感的胎兒組織，又能通過分泌關(guān)鍵因子實(shí)現(xiàn)抗纖維化和肝再生。
?不過，要讓 HepLPCs 從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，必須先解答兩個(gè)關(guān)鍵問題：這些細(xì)胞的基因組是否穩(wěn)定？它們?cè)隗w內(nèi)如何發(fā)揮作用？而轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，在這項(xiàng)工作中發(fā)揮了一定的作用。
二、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序驗(yàn)證HepLPC的祖細(xì)胞功能
?紐科生物對(duì)符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn)的 HepLPCs 及其對(duì)應(yīng)的原代人肝細(xì)胞（PHH）進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組 RNA 測(cè)序（RNA-seq）分析。通過主成分分析和與肝細(xì)胞受體信號(hào)通路相關(guān)的基因的表達(dá)水平的分析發(fā)現(xiàn)，盡管有一組樣本發(fā)生了較大的變異，但是總體而言該通路是呈現(xiàn)上升趨勢(shì)的，說明HepLPCs對(duì)肝細(xì)胞的生長有著正向的作用。
? ? ? 之后，研究團(tuán)隊(duì)又挑選出了一些關(guān)于祖細(xì)胞功能相關(guān)的基因分析其表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在HepLPCs中，肝細(xì)胞代謝基因(CYP3A4、UGT1A9、FAH、ALB)和祖細(xì)胞/膽管細(xì)胞標(biāo)記基因(KRT19、EPCAM、CCL2、SOX9、TGFB1)都有富集現(xiàn)象，由此可以推測(cè)出HepLPCs能表現(xiàn)出雙能祖細(xì)胞的特性。
?更進(jìn)一步通過GSVA分析對(duì)功能進(jìn)行探索。基因集變異分析（GSVA）表明，HepLPCs 中富集的 GO-BP 和 KEGG 通路與細(xì)胞增殖和再生相關(guān)，包括 WNT、NOTCH 和 Hippo 信號(hào)通路，這表明它們保留了祖細(xì)胞的特征。
通過以上分析，可以確認(rèn)HepLPCs擁有細(xì)胞治療肝硬化的潛能，而接下來就要驗(yàn)證其進(jìn)行細(xì)胞治療的安全性。
三、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序驗(yàn)證HepLPCs的安全性
?要確保細(xì)胞治療的安全性，首先要保證細(xì)胞本身 “健康無隱患”—— 尤其是基因組完整性，避免因重編程導(dǎo)致基因缺失、擴(kuò)增或突變，進(jìn)而引發(fā)致瘤風(fēng)險(xiǎn)。
HepLPCs 及其 “母體” 原代肝細(xì)胞（PHHs）進(jìn)行基因組對(duì)比分析，結(jié)果顯示：經(jīng)過小分子誘導(dǎo)的重編程過程后，HepLPCs 的基因組未出現(xiàn)任何顯著的長片段缺失或擴(kuò)增，即使傳代至第 10 代，細(xì)胞仍能維持正常的二倍體核型（即染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)正常）。這一結(jié)果通過基因?qū)用娴臏y(cè)序得到驗(yàn)證，直接排除了 HepLPCs 因基因組異常導(dǎo)致的安全風(fēng)險(xiǎn)。
?不僅如此，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）還進(jìn)一步揭示了 HepLPCs 的 “功能身份”：它們同時(shí)表達(dá)肝臟特異性基因（如白蛋白 ALB、肝細(xì)胞核因子 4A HNF4A）和干 / 祖細(xì)胞基因（如 CD44、CD90），且不表達(dá) MHC II 類抗原（HLA-DP/DQ/DR）。這意味著 HepLPCs 既保留了肝細(xì)胞的部分功能，又具備祖細(xì)胞的增殖能力，同時(shí)還擁有 “低免疫原性”—— 后續(xù)臨床治療中無需使用免疫抑制劑，也不會(huì)引發(fā)排斥反應(yīng)，這一特性通過轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)譜分析得到了明確證實(shí)。
三、測(cè)序與實(shí)驗(yàn)結(jié)合，驗(yàn)證HepLPCs療效
?除了安全性，HepLPCs 的治療效果是另一核心關(guān)注點(diǎn)。研究團(tuán)隊(duì)通過 “細(xì)胞功能驗(yàn)證→動(dòng)物模型試驗(yàn)→人體臨床試驗(yàn)” 的三步走策略，逐步證實(shí)了其有效性。
?1. 細(xì)胞層面：分泌關(guān)鍵因子，直擊纖維化痛點(diǎn)
? ? ?通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，HepLPCs 中與 “細(xì)胞外基質(zhì)降解” 和 “肝細(xì)胞生長因子（HGF）信號(hào)通路” 相關(guān)的基因顯著上調(diào)，尤其是基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP1、MMP3）和 HGF 的表達(dá)量遠(yuǎn)高于原代肝細(xì)胞。后續(xù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：HepLPCs 的培養(yǎng)上清液能有效降解肝星狀細(xì)胞（LX-2）產(chǎn)生的纖維化標(biāo)志物 Col1A1，同時(shí)促進(jìn)原代肝細(xì)胞增殖 —— 而這兩種效應(yīng)，恰好能分別對(duì)應(yīng) “逆轉(zhuǎn)肝纖維化” 和 “促進(jìn)肝再生” 兩大核心治療需求。
2. 動(dòng)物模型：顯著改善肝硬化，無致瘤風(fēng)險(xiǎn)
?在硫代乙酰胺（TAA）誘導(dǎo)的大鼠肝硬化模型中，HepLPCs 通過門靜脈移植后，能顯著減少肝臟細(xì)胞外基質(zhì)積聚，降低 Col1A1 和纖連蛋白水平，同時(shí)改善肝功能。生物分布研究顯示，HepLPCs 在體內(nèi)留存時(shí)間約 1 周，其治療益處主要源于旁分泌信號(hào)（即分泌 MMPs、HGF 等因子），而非長期植入——這與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序揭示的 “高分泌型” 基因特征完全吻合。
?更關(guān)鍵的是，在免疫缺陷小鼠的致瘤性試驗(yàn)中，HepLPCs 接種后 115 天內(nèi)未出現(xiàn)任何腫瘤，而對(duì)照組 HeLa 細(xì)胞的致瘤率為 100%，進(jìn)一步證實(shí)了其安全性。
3. 人體臨床試驗(yàn)：9 例患者驗(yàn)證，安全且初見療效
基于前期的充分驗(yàn)證，研究團(tuán)隊(duì)啟動(dòng)了首次人體臨床試驗(yàn)，9 名肝硬化患者（以乙肝相關(guān)肝硬化為主）通過肝動(dòng)脈輸注接受 HepLPCs 治療，未使用免疫抑制劑。結(jié)果顯示：所有患者均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件，僅報(bào)告便秘、瘙癢等輕微癥狀，且與治療無關(guān)；8 名完成 6 個(gè)月隨訪的患者中，部分人出現(xiàn)肝生化指標(biāo)（如膽紅素、白蛋白）、凝血功能（如 PT、APTT）和門靜脈高壓指標(biāo)（如脾體積縮?。┑母纳啤Ｆ渲?1 名原本在肝移植等待名單上的患者，Child-Pugh 評(píng)分從 9 分降至 5 分，最終成功脫離移植名單——這一臨床結(jié)果，印證了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序預(yù)測(cè)的 HepLPCs “功能潛力”。
四、未來的展望
這項(xiàng)研究的意義，不僅在于開發(fā)了一種新的細(xì)胞治療方案，更在于通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等精準(zhǔn)技術(shù)，為 “細(xì)胞治療的安全性和有效性” 提供了可驗(yàn)證、可追溯的機(jī)制支撐。
目前，HepLPCs 已展現(xiàn)出 “安全可行、療效初步明確” 的優(yōu)勢(shì)，但研究團(tuán)隊(duì)也指出，未來還需通過更大規(guī)模的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證其在失代償期肝硬化、慢加急性肝衰竭患者中的療效，并通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序深入探索患者個(gè)體差異的分子機(jī)制，為精準(zhǔn)治療提供依據(jù)。
對(duì)于肝硬化患者而言，HepLPCs 療法的出現(xiàn)，無疑為那些無法等待肝移植、或不適合手術(shù)的患者，打開了一扇新的希望之門。而轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在其中扮演的 “安全驗(yàn)證者” 和 “機(jī)制解析者” 角色，也為更多細(xì)胞治療研究提供了可借鑒的范式 —— 用精準(zhǔn)的基因數(shù)據(jù)，為創(chuàng)新療法的臨床轉(zhuǎn)化保駕護(hù)航。
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