GL261細(xì)胞是小鼠（C57BL/6背景）膠質(zhì)瘤（glioma）/膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma, GBM）模型細(xì)胞系，是腦腫瘤尤其是免疫腫瘤學(xué)研究中最經(jīng)典的同基因（syngeneic）模型之一；1939年通過顱內(nèi)注射3-甲基膽蒽（3-methylcholanthrene）誘導(dǎo)C57BL/6小鼠產(chǎn)生膠質(zhì)瘤，后于20世紀(jì)90年代建立體外培養(yǎng)細(xì)胞系。細(xì)胞形態(tài)具有多形性（pleomorphic），呈膠質(zhì)細(xì)胞/星形細(xì)胞樣，部分細(xì)胞紡錘形（spindle-shaped）或成纖維細(xì)胞樣（fibroblast-like），貼壁生長成單層。
細(xì)胞名稱：小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤
細(xì)胞簡稱：GL261
產(chǎn)品貨號：TCM-C793
種屬來源：小鼠
組織來源：膠質(zhì)瘤
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%P/S
配套培養(yǎng)基貨號：TCM-G793
傳代比例：1:2-1:4，每2-3天換液一次
倍增時間：28-36h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
推薦海星HyCyte?一步凍存液（即用型、無血清、無需程序降溫），貨號：GUCP-R201
質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌、支原體檢測均為陰性
小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤(GL261)培養(yǎng)注意要點
1. 小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤（GL261）生長特性：
小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤（Gl261）弱貼壁生長的細(xì)胞特性：細(xì)胞貼壁生長，細(xì)胞貼壁能力中等，形態(tài)多樣，倍增時間良好，培養(yǎng)過程中偶見貼壁不牢或聚團(tuán)情況，低溫、運輸?shù)却碳ば螒B(tài)易皺縮或脫落，可選擇包被培養(yǎng)。
2.?小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤（GL261）培養(yǎng)注意事項：
① 該細(xì)胞貼壁不強(qiáng)，在遇到運輸?shù)蜏丶罢鹗?、室溫靜置太長時間、添加的培養(yǎng)基或其他試劑過冷等情況時會出現(xiàn)明顯的細(xì)胞回縮變粗變短甚至脫落的現(xiàn)象，及時放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)后可恢復(fù)正常。
② 消化控制：該細(xì)胞消化時間偏短，消化時注意控制消化時間，鏡下細(xì)胞變圓輕拍培養(yǎng)瓶可以脫落，及時終止消化。
③ 吹打力度：輕柔吹打，避免產(chǎn)生大量氣泡，氣泡會影響細(xì)胞貼壁和增殖。
④ 試劑溫度：胰酶、培養(yǎng)基、PBS 使用前需預(yù)熱至 37℃，避免低溫刺激細(xì)胞。
⑤ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。（PS：血清、培養(yǎng)基更換細(xì)胞狀態(tài)差？直接使用對應(yīng)專培（TCM-G793），細(xì)胞狀態(tài)更穩(wěn)定，簡單又省心）。⑥ 密度控制：密度過低時，細(xì)胞生長速度減慢；長時間高密度培養(yǎng)細(xì)胞狀態(tài)容易不佳，建議細(xì)胞生長至80%密度時傳代。
⑦ 細(xì)胞培養(yǎng)過程中可能會有聚團(tuán)情況出現(xiàn)，傳代的時候注意盡量輕柔吹散細(xì)胞。若成團(tuán)嚴(yán)重且難以解決，可嘗試其他品牌的血清，或使用多聚賴氨酸/明膠包被的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)。
GL261細(xì)胞聚團(tuán)、不貼壁處理辦法
1. GL261細(xì)胞在培養(yǎng)階段出現(xiàn)聚團(tuán)、不貼壁現(xiàn)象處理辦法：
(1)?輕微聚團(tuán)、不貼壁，可重新消化：收集不貼壁細(xì)胞，PBS潤洗后，胰酶消化時間比常規(guī)延長0.5min，吹打時增加1–2次輕柔吹打。
(2)?若聚團(tuán)嚴(yán)重，可通過沉降的方式去除聚團(tuán)細(xì)胞：
①?細(xì)胞正常消化收集至15mL離心管內(nèi)進(jìn)行離心，離心后去除上清，使用約2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重懸后豎直離心管靜置5-10min，取上方1.5mL左右細(xì)胞懸液（細(xì)胞團(tuán)較大沉降速度較快）鏡下觀察是否為單顆細(xì)胞，如單顆細(xì)胞占大部分即可接種回培養(yǎng)器皿。如有大量細(xì)胞團(tuán)可再進(jìn)行沉降后取上方細(xì)胞懸液。
② 底部沉降細(xì)胞團(tuán)較少時可以直接丟棄，較多時，收集完上層懸液后再次輕柔吹打或離心后胰酶消化1-2min，終止消化后正常離心重懸接種。
③?處理后細(xì)胞聚團(tuán)反復(fù)，建議更換更優(yōu)質(zhì)的血清或包被培養(yǎng)。
④ GL261細(xì)胞運輸顛簸皺縮、聚團(tuán) (需37°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)恢復(fù))。
2. HyCyte? 0.1%明膠溶液步驟：
① 使用2-3 mL的HyCyte??0.1%明膠平鋪T25瓶底面即可；
② 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)包被0.5 h;
③?包被結(jié)束后吸去明膠0.1%明膠;
④ 晾干包被的器皿后再使用。
相關(guān)參考文獻(xiàn)：
1.Sanchez, V.E., Lynes, J.P., Walbridge, S. et al. GL261 luciferase-expressing cells elicit an anti-tumor immune response: an evaluation of murine glioma models. Sci Rep 10, 11003 (2020). https://doi.org/10.1038/s41598-020-67411-w
2.Szatmári T, Lumniczky K, Désaknai S, et al. Detailed characterization of the mouse glioma 261 tumor model for experimental glioblastoma therapy. Cancer Sci. 2006;97(6):546-553. doi:10.1111/j.1349-7006.2006.00208.x
3.Raphael Pineau, Pierre Jean Le Reste, Tony Avril, Ulrich Jarry, Eric Chevet, Diana Pelizzari-Raymundo,Protocol to generate two distinct standard-of-care murine glioblastoma models for evaluating novel combination therapies,
STAR Protocols,Volume 5, Issue 3,2024,103304,ISSN 2666-1667.
技術(shù)服務(wù)：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建/文庫病毒、分子診斷參考品/突變基因參考品/融合基因參考品、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn) / 細(xì)胞干擾
細(xì)胞試劑：HyCyte?干細(xì)胞/原代細(xì)胞/細(xì)胞株、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、細(xì)胞專用培養(yǎng)基、基因編輯試劑盒、病毒現(xiàn)貨、預(yù)篩選胎牛血清
