吸棄培養(yǎng)基中原培養(yǎng)基

用PBS清洗2次

加入1ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化

待消化完全后，繼續(xù)加入1ml含10%FBS的1640培養(yǎng)基終止消化

吹打混勻，移入15ml離心管中

800r/min，離心5min，棄上清液

加入1ml含10%FBS的1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

吸取10ul細(xì)胞懸液至1.5ml離心管中，加入90ul含10%FBS 的1640培養(yǎng)基，吹打混勻

用95%乙醇擦拭干凈細(xì)胞計(jì)數(shù)板及蓋玻片，蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上方

吸取10ul細(xì)胞懸液緩慢加入（沿計(jì)數(shù)板邊緣），避免產(chǎn)生氣泡

低倍鏡下觀察計(jì)數(shù)板，確認(rèn)細(xì)胞平均分布，無氣泡
高倍鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算四角大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，壓線細(xì)胞只算左側(cè)和上方

計(jì)算（細(xì)胞密度）：稀釋后細(xì)胞數(shù)/ml = 四大格細(xì)胞總數(shù)/4 *10000
（1ml是因?yàn)榧恿?ml的含10%FBS的1640培養(yǎng)基）