產(chǎn)品概述
兔抗MCM3抗體親和純化是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人、小鼠源MCM3（微小染色體維持蛋白3）的高濃度兔多克隆抗體（貨號：A300-192A）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度高達(dá)1000 μg/ml，適用于免疫沉淀（IP）、免疫印跡（WB）和免疫組織化學(xué)（IHC）等多種應(yīng)用。其高稀釋比范圍（WB達(dá)1:25,000）使其成為DNA復(fù)制與細(xì)胞周期研究中高性價(jià)比的檢測工具。
技術(shù)參數(shù)
參數(shù)?| 詳細(xì)信息
靶點(diǎn)?| MCM3（微小染色體維持復(fù)合物組分3）
反應(yīng)種屬?| 小鼠、人
應(yīng)用?| IHC、IP、WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
抗體形式?| 完整IgG
免疫原區(qū)域?| 第500–550位氨基酸之間
亞型?| IgG
標(biāo)記?| 非偶聯(lián)
純化方式?| 抗原親和純化
抗原種屬?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
儲(chǔ)存溫度?| 2 – 8 °C
有效期?| 收貨之日起1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉
儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
儲(chǔ)存條件：2–8°C，切勿冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性喪失。
有效期：自收貨之日起1年，在未受污染且按推薦條件儲(chǔ)存的情況下。
緩沖液組分：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。
注意事項(xiàng)：疊氮化鈉可能抑制過氧化物酶活性。若計(jì)劃將本抗體用于免疫沉淀后結(jié)合HRP標(biāo)記的二抗檢測，由于后續(xù)步驟會(huì)經(jīng)過多次洗滌，影響可忽略；但若需直接標(biāo)記本抗體，請預(yù)先通過透析去除疊氮化鈉。
應(yīng)用與方法參數(shù)
推薦工作條件
應(yīng)用?| 推薦用量/稀釋度 | 特殊說明
免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:1000 – 1:5000 | FFPE切片需用pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)
免疫沉淀（IP） | 6 μg/mg 裂解液 | 可使用MCM2抗體（A300-191A）或MCM5抗體（A300-195A）沉淀MCM復(fù)合物
免疫印跡（WB） | 1:10,000 – 1:25,000 | 過夜孵育，5%牛奶-TBST封閉
免疫印跡（WB）詳細(xì)方案
1. 封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST（Tris緩沖鹽溶液+0.1% Tween-20）
2. 一抗孵育：推薦4°C搖床過夜（約16小時(shí)）
3. 細(xì)胞裂解液WB檢測：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）作為二抗
4. 免疫沉淀物WB檢測：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景
注意：由于本抗體在WB中推薦稀釋度極高（1:10,000起步），建議初次實(shí)驗(yàn)從1:10,000開始，根據(jù)信號強(qiáng)度向上調(diào)整至1:25,000或更高，以節(jié)約抗體并降低非特異條帶。
免疫沉淀（IP）詳細(xì)方案
用量：每毫克細(xì)胞裂解蛋白使用6 μg抗體。
對照建議：使用同型對照兔IgG（非免疫血清）作為陰性對照。
復(fù)合物共沉淀：如需研究MCM全復(fù)合物（MCM2–7六聚體），可配合使用MCM2抗體（A300-191A）或MCM5抗體（A300-195A）進(jìn)行IP，然后用本抗體檢測MCM3的存在。本抗體也可單獨(dú)用于IP MCM3及其相互作用蛋白。
二抗選擇：IP后WB檢測時(shí)，務(wù)必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗（如HRP標(biāo)記的抗兔輕鏈抗體），以避免與IP抗體的重鏈（~55 kDa）產(chǎn)生交叉反應(yīng)干擾MCM3（~110 kDa）的檢測。
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免疫組織化學(xué)（IHC）詳細(xì)方案
樣本類型：福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片、冰凍切片。
抗原修復(fù)：強(qiáng)烈推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液，通過高壓鍋或微波爐進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。不修復(fù)或使用EDTA緩沖液可能造成信號減弱。
稀釋范圍：1:1000–1:5000。建議從1:2000開始摸索。
檢測系統(tǒng)：由于本抗體為非偶聯(lián)形式，需配合生物素/HRP或熒光標(biāo)記的抗兔二抗（如羊抗兔IgG）及相應(yīng)的顯色/熒光檢測系統(tǒng)。
別名
宮頸癌原癌基因5（HCC5）
DNA聚合酶α全酶相關(guān)蛋白P1（P1.h）
DNA復(fù)制因子MCM3
p102
復(fù)制執(zhí)照因子β亞基（RLF subunit beta, RLFB）
hRlf β亞基
典型應(yīng)用場景
1. 細(xì)胞周期同步化實(shí)驗(yàn)：檢測不同細(xì)胞周期階段（G1/S/G2/M）MCM3的染色質(zhì)結(jié)合量或總表達(dá)水平變化。
2. 復(fù)制執(zhí)照狀態(tài)分析：結(jié)合染色質(zhì)分離技術(shù)，用WB檢測染色質(zhì)結(jié)合型MCM3，評估復(fù)制執(zhí)照狀態(tài)。
3. 腫瘤增殖標(biāo)記物：在人腫瘤組織切片（乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌等）中進(jìn)行IHC染色，MCM3陽性細(xì)胞核比例可作為增殖指數(shù)。
4. 蛋白相互作用研究：利用本抗體進(jìn)行免疫共沉淀（co-IP），結(jié)合質(zhì)譜或WB鑒定與MCM3相互作用的蛋白（如MCM5、MCM3AP等）。
5. DNA復(fù)制抑制劑藥效評價(jià)：藥物處理后檢測MCM3的表達(dá)或染色質(zhì)裝載變化，評估對復(fù)制起始的影響。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
物種交叉反應(yīng)性：已驗(yàn)證人與小鼠；大鼠、猴等其他物種需自行測試。
IHC抗原修復(fù)至關(guān)重要：未修復(fù)或修復(fù)不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致信號極弱甚至無信號。
WB高稀釋度建議：首次使用可嘗試1:5000，若信號過強(qiáng)出現(xiàn)背景，可提高至1:15,000–1:25,000。
IP-WB的輕鏈問題：務(wù)必使用抗兔輕鏈特異性二抗，否則會(huì)檢測到50 kDa左右的重鏈條帶，干擾目標(biāo)蛋白附近區(qū)域的判斷。
疊氮化鈉影響：若進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或動(dòng)物注射實(shí)驗(yàn)，需通過透析去除。
*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。
