產(chǎn)品概述
本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對XLF（XRCC4樣因子，又稱NHEJ1或Cernunnos）的兔多克隆抗體，貨號A300-730A。該抗體特異性識別人源XLF蛋白，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測?？贵w經(jīng)抗原親和純化，濃度為200 μg/ml，為DNA雙鏈斷裂修復(fù)及V(D)J重組研究提供了高特異性的檢測工具。
核心規(guī)格參數(shù)
項目?| 詳細信息
靶點?| XLF (XRCC4-like factor / NHEJ1)
反應(yīng)性?| 人
應(yīng)用?| IHC, IP, WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第249位至C末端（第299位）區(qū)域
亞型?| IgG
偶聯(lián)物?| 非偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
抗原物種?| 人
濃度?| 200 μg/ml
保存條件?| 2 - 8 °C
有效期?| 收貨之日起1年
緩沖液?| Tris緩沖鹽溶液，含0.1% BSA和0.09%疊氮化鈉
應(yīng)用方法與推薦稀釋度
蛋白質(zhì)印跡（WB）
所有WB實驗使用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育。
細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗。
免疫沉淀產(chǎn)物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低輕鏈非特異性信號。
推薦稀釋度：1:2000 - 1:10,000
免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 細胞裂解液
操作要點：
1. 將6 μg抗體與含1 mg蛋白的細胞裂解液混合
2. 4°C孵育1-2小時或過夜
3. 加入蛋白A/G瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時
4. 充分洗滌沉淀復(fù)合物（建議4-5次）
5. 使用SDS上樣緩沖液洗脫，煮沸變性后進行WB檢測
免疫組織化學（IHC）
推薦稀釋度：1:100 - 1:500
抗原修復(fù)：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。該步驟對于暴露XLF的表位、獲得清晰染色信號至關(guān)重要。
染色建議：
脫蠟、水化后，在檸檬酸緩沖液中微波或高壓加熱修復(fù)
冷卻后按常規(guī)IHC流程操作
建議同時設(shè)置陰性對照（兔IgG或未免疫血清）
研究價值
高特異性的XLF抗體對于以下研究至關(guān)重要：
DNA損傷修復(fù)通路中XLF與其他NHEJ因子（如XRCC4、Ligase IV）的相互作用
免疫系統(tǒng)發(fā)育中V(D)J重組的機制解析
放射治療或化療藥物敏感性相關(guān)標志物檢測
小頭畸形及免疫缺陷疾病中XLF突變的功能驗證
別名列表
non-homologous end-joining factor 1
nonhomologous end-joining factor 1
protein cernunnos
XLF
XRCC4-like factor
儲存與穩(wěn)定性注意事項
1.保存溫度：2-8°C，請勿冷凍。緩沖液中含有BSA作為穩(wěn)定蛋白，可有效防止低濃度抗體（200 μg/ml）在儲存過程中的吸附損失。
2.有效期：收貨之日起1年內(nèi)穩(wěn)定。
3.防腐劑：緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉，使用時應(yīng)遵守實驗室安全規(guī)范。
4.分裝建議：如需長期使用，可小量分裝（例如20-50 μl/管），保存于2-8°C，避免冷凍及反復(fù)取用導(dǎo)致的污染風險。
功能性優(yōu)勢總結(jié)
1.C末端靶向表位（250-299）：該區(qū)域為XLF特有的C端結(jié)構(gòu)域，與XRCC4結(jié)合及復(fù)合物穩(wěn)定相關(guān)，抗體特異性識別該區(qū)域可減少與其他NHEJ因子的交叉反應(yīng)。
2.三重應(yīng)用驗證：IHC（帶抗原修復(fù)推薦）、IP（6 μg/mg裂解液）、WB（1:2000-1:10000）提供完整實驗體系，尤其適用于NHEJ通路中蛋白定位、互作及表達水平的多維度分析。
3.IHC優(yōu)化條件明確：推薦使用檸檬酸緩沖液pH 6.0進行抗原修復(fù)，免去用戶自行摸索修復(fù)條件的耗時，確保FFPE組織染色成功率。
4.親和純化+BSA穩(wěn)定配方：既保證了高特異性，又防止低濃度抗體在操作過程中的非特異性吸附，提高實驗可重復(fù)性。
5.IP-WB一體化方案：配套抗輕鏈HRP二抗及豬血清封閉，有效消除沉淀中重鏈干擾，便于檢測XLF與XRCC4或連接酶IV的共沉淀。
