首先借助SDS-PAGE凝膠，將總蛋白按照不同分子量大小進(jìn)行分離，然后將膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，再利用相應(yīng)的靶標(biāo)抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。

一、Western Blot 實(shí)驗(yàn)流程總覽

圖片來(lái)自諾唯贊官網(wǎng).png

1. 制膠（PAGE凝膠快速制備試劑盒）
   a. 取等體積下層膠溶液和下層膠緩沖液，各2.7mL，混勻；
   b. 向上述步驟a的混合溶液中加入60μL的改良型促凝劑，混勻；
   c. 將步驟b的混合溶液注入制膠玻璃板中，
   d. 待下層膠凝固后（約15min），倒去上層苯乙醇；
   e. 取等體積上層膠溶液和彩色上層膠緩沖液，各0.75mL，混勻；
   f. 將步驟e的混合溶液中加入15μL的改良型促凝劑，混勻；
   g. 步驟f的混合溶液注入制膠玻璃板中，插入梳子；
   h. 待上層膠凝固后，拔去梳子即可用于電泳。
   分離膠（下層膠）80v，30min
   濃縮膠（上層膠）120v，1h

   
   
   制膠配方.png

2. 蛋白電泳
   a、組裝SDS-PAGE
   b、蛋白上樣
   c、接通電源、開始電泳

   
   
   上樣與電泳.png
   
   
   跑電泳.jpg

3. 轉(zhuǎn)膜

4. 封閉、孵一抗二抗

5. 顯影