產(chǎn)品概述
本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對ATM（ataxia telangiectasia mutated）蛋白的兔多克隆抗體，貨號A300-299A。該抗體特異性識別人源ATM，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測?？贵w經(jīng)抗原親和純化，濃度為1000 μg/ml，為DNA損傷應答機制研究提供了高靈敏度、高特異性的檢測工具。
核心規(guī)格參數(shù)
項目?| 詳細信息
靶點?| ATM
反應性?| 人
應用?| IHC, IP, WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第2550-2600位氨基酸區(qū)域
亞型?| IgG
偶聯(lián)物?| 非偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
抗原物種?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
保存條件?| 2-8 °C
有效期?| 收貨之日起1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉
應用方法與推薦稀釋度
蛋白質(zhì)印跡（WB）
所有WB實驗使用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜孵育。
細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗。
免疫沉淀產(chǎn)物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低輕鏈非特異性信號。
推薦稀釋度：1:5000 1:25,000
凝膠建議：推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠進行電泳分離，以有效分離ATM大蛋白（約350 kDa）。
免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 細胞裂解液
操作要點：
1. 將6 μg抗體與含1 mg蛋白的細胞裂解液混合
2. 4°C孵育1-2小時或過夜
3. 加入蛋白A/G瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時
4. 充分洗滌沉淀復合物（建議4-5次）
5. 使用SDS上樣緩沖液洗脫，煮沸變性后進行WB檢測
免疫組織化學（IHC）
推薦稀釋度：1:500 1:2000
重要注意事項：不建議進行抗原修復（Epitope retrieval is not recommended）。常規(guī)的加熱或酶修復可能破壞該抗體識別的表位結構，建議直接使用未修復的石蠟切片或冰凍切片進行染色。
產(chǎn)品背景信息
蛋白功能概述
ATM基因是導致神經(jīng)退行性疾病——共濟失調(diào)性毛細血管擴張癥（Ataxia Telangiectasia, AT）的致病基因。AT的臨床特征包括神經(jīng)退行性變、免疫功能障礙、對DNA損傷的敏感性增加以及癌癥易感性。ATM是一種蛋白激酶，在DNA損傷應答（DDR）中處于核心樞紐地位。
分子機制
在DNA雙鏈斷裂（DSBs）發(fā)生時，ATM被迅速激活，并啟動級聯(lián)磷酸化信號，其底物包括：
p53：調(diào)控細胞周期停滯和凋亡
BRCA1：參與同源重組修復
p53結合蛋白（53BP1）：調(diào)控DNA修復途徑選擇
CHK2：檢查點激酶，介導細胞周期阻滯
RAD9、RAD17：參與檢查點激活
MDM4：調(diào)節(jié)p53活性
通過磷酸化上述底物，ATM協(xié)調(diào)DNA修復、細胞周期檢查點、細胞衰老和凋亡等響應，維護基因組穩(wěn)定性。
研究意義
由于ATM在DNA損傷應答及腫瘤抑制中的關鍵作用，高特異性的ATM抗體對于以下研究至關重要：
DNA雙鏈斷裂修復機制解析
抗癌藥物（如PARP抑制劑、放療）敏感性評估
共濟失調(diào)性毛細血管擴張癥的分子病理研究
ATM信號通路中新型底物的篩選與驗證
儲存與穩(wěn)定性注意事項
1. 保存溫度：2-8°C，請勿冷凍。ATM作為大分子蛋白抗體，反復凍融會導致抗體變性及活性顯著下降。
2. 有效期：收貨之日起1年內(nèi)穩(wěn)定。
3. 防腐劑：緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉，使用時應遵守實驗室安全規(guī)范。
4. 分裝建議：如需長期使用，可將抗體分裝成單次用量的小份，但仍保存于2-8°C，避免冷凍。
功能性優(yōu)勢總結
1. 超高濃度（1000 μg/ml）：提供充足的抗體總量，適合大規(guī)?；蜷L期系列實驗，降低批次間差異風險。
2. 寬WB稀釋范圍（1:5000-1:25,000）：提供極大實驗靈活性，可根據(jù)靶蛋白表達豐度自由調(diào)整。
3. 三重應用驗證：IHC、IP、WB均經(jīng)優(yōu)化驗證，尤其適用于DNA損傷研究中的多維度檢測需求。
4. 大蛋白檢測優(yōu)化：明確建議使用3-8% Tris-醋酸凝膠，針對性解決ATM（~350 kDa）轉印效率低的常見問題。
5. IP-WB配套方案：提供抗輕鏈HRP二抗及豬血清封閉建議，有效避免沉淀中重鏈干擾，確保IP產(chǎn)物檢測結果清晰。
6. 明確IHC限制條件：指出抗原修復不推薦，避免用戶因操作不當導致假陰性結果。
注意事項
由于ATM分子量較大（約350 kDa），轉膜條件建議采用濕轉法，時間延長至2-3小時或使用低電壓過夜轉膜。
對于組織IHC染色，建議使用陽性對照（如正常扁桃體或睪丸組織）驗證抗體性能。
IP實驗前建議通過WB驗證裂解液中ATM的表達水平，必要時增加抗體用量至9-12 μg/mg裂解液。
