本抗體為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號(hào)：A300-508A），特異性識(shí)別AMPK催化亞基α2的第350–400位氨基酸區(qū)域。經(jīng)抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯(lián)任何標(biāo)記物（Unconjugated），濃度為1000 μg/mL（1 mg/mL）。適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB），反應(yīng)種屬包括人和小鼠。
產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)
參數(shù)項(xiàng)目?詳細(xì)規(guī)格
目標(biāo)抗原?AMPK alpha 2（AMPK催化亞基α2）
反應(yīng)種屬?小鼠、人
宿主來(lái)源?兔
克隆類(lèi)型?多克隆
抗體形式?完整IgG
免疫原?第350–400位氨基酸之間的區(qū)域
亞型?IgG
偶聯(lián)物?無(wú)
純度?抗原親和純化
抗原物種?人
濃度?1000 μg/mL（1 mg/mL）
保存條件?2–8 °C
有效期限?自收貨起1年
緩沖體系?Tris-枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉
濃度測(cè)定依據(jù)：采用比爾定律（Beer’s Law），標(biāo)準(zhǔn)為1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光值（A280）為1.4。
本抗體的靶向優(yōu)勢(shì)：識(shí)別第350–400位氨基酸區(qū)域，可特異性檢測(cè)α2亞基而不與α1交叉反應(yīng)（該區(qū)域在α1和α2之間差異較大）。適用于區(qū)分兩種亞基的表達(dá)水平及功能研究。
別名：AMPKα2、AMPK2、AMPKa2、PRKAA、ACACA激酶、HMGCR激酶、乙酰輔酶A羧化酶激酶等。
適用范圍與推薦使用條件
> 重要說(shuō)明：本抗體的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)集中于免疫沉淀（IP）和Western blot（WB）。使用前建議根據(jù)樣本類(lèi)型（細(xì)胞裂解液、組織勻漿）和表達(dá)豐度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。
應(yīng)用技術(shù)?推薦使用條件?備注
免疫沉淀（IP） 6 μg抗體/毫克裂解液 按總蛋白質(zhì)量計(jì)算抗體用量
蛋白質(zhì)印跡（WB） 1:500 – 1:5,000 推薦起始稀釋度1:1,000
Western blot 詳細(xì)操作指南
標(biāo)準(zhǔn)WB流程（細(xì)胞裂解液）
以下參數(shù)已由生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證并推薦：
樣本制備：使用含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液（如RIPA或NP-40裂解液）提取總蛋白
凝膠選擇：SDS-PAGE（推薦8–10%分離膠；AMPKα2分子量約62 kDa）
轉(zhuǎn)膜：PVDF或硝酸纖維素膜，恒流轉(zhuǎn)膜（建議300 mA，90–120分鐘）
封閉液：5% 脫脂牛奶-TBST
抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST（與封閉液一致）
一抗孵育：過(guò)夜（推薦4°C搖床孵育）
一抗稀釋度：1:500 – 1:5,000（一般從1:1,000開(kāi)始測(cè)試）
洗滌：TBST洗滌3次，每次10分鐘
二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP偶聯(lián)抗體，貨號(hào) A120-101P（或其他等效產(chǎn)品），按廠(chǎng)商推薦稀釋度使用（通常1:5,000–1:20,000）
檢測(cè)：化學(xué)發(fā)光法（ECL）顯影
免疫沉淀后Western blot的特殊要求
當(dāng)本抗體用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)，隨后對(duì)免疫沉淀復(fù)合物進(jìn)行Western blot檢測(cè)時(shí)，洗脫產(chǎn)物中包含用于IP的抗體（兔IgG）的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa）。常規(guī)抗兔IgG（H+L）二抗會(huì)同時(shí)識(shí)別它們，可能在目標(biāo)蛋白（AMPKα2，約62 kDa）附近或輕鏈/重鏈位置產(chǎn)生干擾條帶（尤其是重鏈55 kDa非常接近目標(biāo)62 kDa）。
優(yōu)化方案（生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室推薦）：
1. 二抗選擇：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（僅識(shí)別兔IgG輕鏈，不識(shí)別重鏈）
2. 封閉緩沖液補(bǔ)充：在封閉液中加入5% 正常豬血清（貨號(hào) S100-020），進(jìn)一步降低非特異性背景
操作步驟：
完成免疫沉淀后，將洗脫的蛋白樣本煮沸變性，進(jìn)行SDS-PAGE（8–10%凝膠）
轉(zhuǎn)膜后，封閉液使用含5%正常豬血清的5%牛奶-TBST（或單獨(dú)5%正常豬血清-TBST），室溫封閉1小時(shí)
一抗孵育：仍使用本抗體，稀釋度1:1,000（或1:500–1:2,000），用含5%正常豬血清的封閉液稀釋?zhuān)?°C過(guò)夜
洗滌：TBST洗滌3次，每次10分鐘
二抗孵育：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（按照廠(chǎng)商推薦稀釋度，通常1:2,000–1:10,000），室溫1小時(shí)
洗滌：TBST洗滌3–5次
檢測(cè)：ECL顯影
原理：免疫沉淀洗脫物中兔IgG重鏈（55 kDa）不會(huì)被輕鏈特異性二抗識(shí)別，因此膜上不會(huì)出現(xiàn)55 kDa的非特異性條帶，從而清晰觀察62 kDa位置的AMPKα2信號(hào)。輕鏈（25 kDa）信號(hào)仍可被檢測(cè)到但遠(yuǎn)離目標(biāo)區(qū)域，不影響數(shù)據(jù)分析。
儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
儲(chǔ)存條件：
溫度：2–8°C（嚴(yán)禁冷凍）
防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮化鈉，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)
分裝建議：如需避免反復(fù)取用污染，可無(wú)菌分裝為單次使用量，仍?xún)?chǔ)存于2–8°C（不推薦-20°C，可能引起蛋白聚集和活性下降）
有效期：自收貨之日起12個(gè)月。超過(guò)有效期后使用，建議重新驗(yàn)證效價(jià)（如通過(guò)WB檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照樣本）。
