CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 25? 正式實(shí)驗(yàn)

基礎(chǔ)知識(shí)系列鏈接(節(jié)選):

CRISPR-Cas9學(xué)習(xí)筆記
Cre-LoxP條件性基因編輯系統(tǒng)--學(xué)習(xí)筆記
FLP-FRT系統(tǒng)--誘導(dǎo)性基因編輯inducible gene editing

系列實(shí)驗(yàn)鏈接:

CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
CRISPR-Cas9(三)--sgRNA設(shè)計(jì)好之后
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 1
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 2
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 3
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 4
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 5-15 轉(zhuǎn)染驗(yàn)證
CRISPR-Cas9基因敲除實(shí)驗(yàn)步驟 day 18 轉(zhuǎn)染后驗(yàn)證

經(jīng)過(guò)293FT細(xì)胞驗(yàn)證質(zhì)粒的效果之后,要接著做正式實(shí)驗(yàn)了,這里我們用的方法跟文獻(xiàn)中的就不一樣了。張峰老師組使用的是電轉(zhuǎn)的方法,而我們還是選擇了脂質(zhì)體瞬轉(zhuǎn)的方法,我想這一個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件來(lái)做選擇了。因?yàn)閷W(xué)院的sorting要提前一個(gè)星期預(yù)約,所以我們妥妥的又拖延了一周,好不容易做了一次,因?yàn)榻?jīng)驗(yàn)不足,細(xì)胞也沒(méi)活(一株超難轉(zhuǎn)的細(xì)胞),這周還想接著做,可是管sorting的老師下周休一整周的假,好刺激。Emmm...有點(diǎn)頭大,還是應(yīng)該要提前安排好會(huì)更好。流水賬一樣的記錄,所以實(shí)驗(yàn)就是有這樣那樣的插曲。

感謝師兄DZ

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