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陳巍學(xué)基因視頻學(xué)習(xí)筆記--視頻1：Illumina測(cè)序化學(xué)原理
陳巍學(xué)基因視頻學(xué)習(xí)筆記--視頻7：RNA-seq方法和應(yīng)用
陳巍學(xué)基因視頻學(xué)習(xí)筆記--視頻8：外顯子測(cè)序
陳巍學(xué)基因視頻學(xué)習(xí)筆記--視頻9：small RNA-seq
陳巍學(xué)基因視頻學(xué)習(xí)筆記--視頻10：?jiǎn)渭?xì)胞DNA測(cè)序

單細(xì)胞mRNA遇到的困難：

（1）單細(xì)胞mRNA的量非常少，只有0.2 pg，需要的擴(kuò)增倍數(shù)非常大，很難控制均已覆蓋；
（2）建庫(kù)的時(shí)候如何盡可能的擴(kuò)增mRNA，盡量減少其他RNA的干擾。

解決問(wèn)題：

1. SMART

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詳細(xì)介紹

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之后就是常規(guī)的建庫(kù)即可
方法的巧妙點(diǎn)：
（1）定位引物，保證逆轉(zhuǎn)錄的位置，合成出來(lái)的cDNA之后連上通用引物；
（2）利用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶加C堿基的作用，再用有3個(gè)堿基的上游引物進(jìn)行第二鏈的合成，保證了只有完整的第一鏈cDNA才能被合成出cDNA的第二鏈，保證了雙鏈cDNA是全長(zhǎng)的；
（3）保證PCR擴(kuò)增的一致性，因?yàn)閏DNA的5’和3’都引入了一樣的引物，從而保證了PCR擴(kuò)增效率的一致性。
建庫(kù)測(cè)序情況如下

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2. TargetAmp

第一鏈cDNA

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第二鏈cDNA

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巧妙之處：
不用PCR，用轉(zhuǎn)錄的方法得到文庫(kù)，統(tǒng)一T7啟動(dòng)子，保證了擴(kuò)增效率的均一性，一方面保證了量，另一方面保證了擴(kuò)增效率的一致性。