首先放一張測序示意圖,在DNA片段兩端所加的序列即接頭序列,也就是我們今天要講述的主角。

1 基本概念
1.1 adapter
接頭,為一段已知的短核苷酸序列,用于鏈接未知的目標測序片段
1.2 index或barcode
幾個堿基組成的寡核苷酸鏈,用于在混合測序時,區(qū)分不同樣本
1.3 insert
待測序的目標序列,位于兩個adapter之間

測序片段包括幾個部分:universal_adapter-insert-indexed_adapter。
測序由5'端開始,最開始的幾個堿基無法測得,第一個adapter在數(shù)據(jù)輸出時去除,由于測序讀長的限制,第二個adapter通常測不到。
但是如果插入片段本身較短,測序會測穿,即會得到 insert-部分adapter 這樣的read,這里的adapter便是我們常常提到的需要去除的接頭部分。
2 序列信息
2.1 接頭序列(示例)
universal adapter:
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’
indexed adapter:
5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC(barcode)ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
仔細看上面這對接頭序列,universal adapter的3'末端的T與待測片段新增的A配對,那么剩余序列的反向互補鏈為
GATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTAGATCTCGGTGGTCGCCGTATCATT
與 indexed adapter 的前面12個堿基一致
GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC,即兩段接頭序列部分互補,形成Y型的結(jié)構(gòu)。
2.2 index序列
可根據(jù)fastq序列中的信息獲取
@HWI-ST1276:71:C1162ACXX:1:1101:1208:2458 1:N:0:CGATGT
fastq的格式信息不再贅述,第一行最末的 CGATGT 即本次測序所使用的index。