一、安裝R和R studio 1、確認(rèn)電腦用戶名是英文名2、下載R和Rstudio 1、認(rèn)識(shí)R和Rstudio 1） R是一種編程語(yǔ)言，也是統(tǒng)計(jì)計(jì)算和繪圖的環(huán)境，它匯集了許多...
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NGS012 轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)及ATAC-seq轉(zhuǎn)座因子 Transposon 一段DNA順序可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來(lái)，環(huán)化后插入另一位點(diǎn)，并對(duì)其后的基因起調(diào)控作用，此過(guò)程稱轉(zhuǎn)座。這段序列稱跳躍基因或轉(zhuǎn)座子。轉(zhuǎn)座子是...
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人丑就要多讀書(shū)呀
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PyMOL學(xué)習(xí)筆記
PyMOL是一款生物大分子三維結(jié)構(gòu)顯示軟件，其中“Py”是指此軟件使用Python語(yǔ)言編寫，“MOL”是指Molecule。 PyMOL官網(wǎng)是http://www.PyMOL...
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生物信息學(xué)的學(xué)習(xí)筆記
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蛋白質(zhì)經(jīng)泛素-蛋白酶體降解研究基本思路（圖文詳解）泛素和泛素化介紹 泛素 泛素為含76個(gè)氨基酸、大小約為8.6 kDa的小蛋白質(zhì)，在真核生物中普遍存在且高度保守。人類基因組中的四個(gè)基因編碼泛素：UBB，UBC，UBA52和R...
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@凍春卷 也謝謝你的系列推文(●'?'●)
CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@凍春卷 從去年年底看你的推文開(kāi)始學(xué)習(xí)，現(xiàn)在終于拿到KO細(xì)胞系了，非常感謝你這個(gè)系列推文對(duì)我的幫助！
分享下我個(gè)人挑單克隆過(guò)程：96孔板內(nèi)轉(zhuǎn)移到24孔板（大概2天長(zhǎng)滿），再取24孔板的一半提DNA或者蛋白，更少細(xì)胞量沒(méi)有嘗試。測(cè)序結(jié)果區(qū)分多克隆和單克隆雜合子：前者峰形雜亂無(wú)規(guī)則，后者套峰規(guī)則且比例固定，也可以連T載體確定一下。CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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明白了 謝謝春卷老師(●'?'●)
CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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春卷老師好，關(guān)于單克隆鑒定，有幾點(diǎn)想請(qǐng)教：
1.96孔板內(nèi)的細(xì)胞是否不夠提DNA？
2.96孔板內(nèi)細(xì)胞擴(kuò)出來(lái)推薦是用24孔板 or 12孔板 or 6孔板？
3.對(duì)于測(cè)序套峰的是否無(wú)法區(qū)別是單克隆雜合子還是多個(gè)克隆長(zhǎng)成的？
4.一直沒(méi)有太理解為什么連接T載體可以進(jìn)一步鑒定??
謝謝春卷老師，感激不盡~~CRISPR-Cas9基因編輯7--測(cè)序驗(yàn)證敲除
前言： 使用挑單克隆技術(shù)得到多個(gè)單克隆細(xì)胞系后，就要開(kāi)始驗(yàn)證敲除，除了蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，最終還是要看測(cè)序結(jié)果。關(guān)于測(cè)序的方案也是各有不同，由于之前選用的是CRISPR-Ca...
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@74640e63c49c 我也正在挑單克隆 確實(shí)單個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)出來(lái)的孔就不多... 還要再驗(yàn)證工作量也很大... 共勉 ??
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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@凍春卷 嗯嗯明白了 謝謝春卷老師~ 后面也想做library的screening 希望能多多交流??
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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@74640e63c49c 您好 不知道你是否這樣做了 想請(qǐng)教下把同一基因不同靶點(diǎn)做成pool包病毒后去感染目的細(xì)胞，是否可能一個(gè)目的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)了多個(gè)病毒(包含多個(gè)靶點(diǎn)的sgRNA)，然后該基因同時(shí)發(fā)生多個(gè)靶點(diǎn)的NHEJ，這樣KO效率是否會(huì)高于感染單一病毒？
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
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還有很多其他的設(shè)計(jì)sgRNA的網(wǎng)站，比如CHOPCHOP & CCTop 可以去這些里面看看，還有一些更偏門的軟件設(shè)計(jì)，總之不止zhang lab的這個(gè)設(shè)計(jì)工具的。
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA設(shè)計(jì)
大佬說(shuō)，我只說(shuō)一次，你自己要記住以最火熱的p53為例 Step 1 先找p53基因序列 1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 ...
