外泌體（Exosomes）是細(xì)胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）的一種，大小在30-150nm，由細(xì)胞內(nèi)的多泡小體（Multivesicular bodies,MVB）與細(xì)胞膜融合后以外分泌的形式釋放到細(xì)胞外，廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。

外泌體廣泛參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動。同時，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。

? ? ? ?外泌體研究通常進(jìn)行以下幾個方面的實驗：1.試劑盒或差速超速離心分離；2.透射電鏡拍攝（TEM）；3.納米粒徑跟蹤分析（NTA）；4.Western Blot檢測蛋白標(biāo)志物；5.外泌體高通量測序/芯片；6.外泌體標(biāo)記或示蹤；7.外泌體細(xì)胞功能檢測；8.外泌體動物模型驗證等。

?其中，外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。

(1)透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。

(2)納米顆粒跟蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。

(3)Western blot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；參與生物功能的分子，如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X（ALIX）、腫瘤易感基因101蛋白（TSG101）、熱休克蛋白（HSP70、HSP90），以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白。

(4)外泌體高通量檢測：外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸，可以運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治療。

(5)外泌體標(biāo)記或示蹤：對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或活體示蹤，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前常用親脂性染料對外泌體進(jìn)行標(biāo)記，親脂性染料主要包括兩類，一是PKH67（綠色）和PKH26，二是DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光）。

(6)外泌體功能研究：將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中，與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的功能變化，如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等；或者將外泌體注射入動物模型中，觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。