對(duì)于經(jīng)常做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究者來說，能否從生物材料中獲得符合質(zhì)量要求的DNA，直接關(guān)系到下游實(shí)驗(yàn)的成敗。在眾多的生物材料中，各種動(dòng)物組織是我們經(jīng)常研究的，它對(duì)于很多生命機(jī)...
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磁珠法組織DNA提取試劑的選擇
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磁珠法血液DNA提取試劑的選擇
隨著大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)樣本量的增多，如何高效快速地進(jìn)行核酸檢測(cè)成為研究者關(guān)注的重點(diǎn)。目前，醫(yī)療機(jī)構(gòu)以及檢測(cè)機(jī)構(gòu)幾乎都會(huì)首選血液樣本作為檢測(cè)標(biāo)本。血液DNA提取方法主要有...
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細(xì)胞DNA提取試劑的選擇從細(xì)胞或組織中提取核酸進(jìn)行分子生物學(xué)研究或基因檢測(cè)已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷以及科學(xué)研究的一種重要手段。原理不必多說，做過相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都知道，那就是將細(xì)胞膜破裂，變性膜蛋...
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糞便DNA提取試劑的選擇
隨著腸道菌群宏基因組研究的興起，研究者通過提取腸道全部微生物基因組DNA，構(gòu)建宏基因組文庫，對(duì)菌群多樣性和功能活性、種群結(jié)構(gòu)、協(xié)作關(guān)系、與腸道間關(guān)系、進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行研究，可以...
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拭子RNA提取試劑的選擇
目前，主流的RNA提取方法有Trizol法、離心柱法和磁珠法。其中，Trizol法與離心柱法相比，提取效果相當(dāng)，但因其對(duì)操作者帶來的毒性，現(xiàn)在越來越被棄用。磁珠法可以針對(duì)大...
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苯酚作為蛋白變性劑,同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí),由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .但缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)費(fèi)力，苯酚和氯仿還有一定毒性，我見過的實(shí)驗(yàn)室很少有用這種方法的。試劑盒經(jīng)典的是離心柱(BIODAI)就是把硅膠膜固定在離心管中，類似于超濾膜，用離心力或者負(fù)壓讓液體通過硅膠膜，核酸就留在膜上。在經(jīng)過洗滌、洗脫的步驟得到核酸。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、時(shí)間短，現(xiàn)在也能達(dá)到很高的質(zhì)量
核酸提取經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
一、核酸 核苷酸單體聚合而成的生物大分子，是生物細(xì)胞最基本和最重要的成分。一般認(rèn)為，生物進(jìn)化即始于核酸，因?yàn)樵谒猩镔|(zhì)中只有核酸能夠自我復(fù)制。今天已知核酸是生物遺傳信息的...
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37℃15min是一個(gè)逆轉(zhuǎn)錄的過程，而85℃5s是滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，我們實(shí)驗(yàn)用的BIODAI逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)修要50℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)45分鐘，再85℃?5分鐘滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，如果需要獲取的目標(biāo)cDNA長度大于5kb，逆轉(zhuǎn)錄時(shí)間就需要相應(yīng)延長到60分鐘。
普通PCR、原位PCR、反向PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR的 基本原理和操作步驟（三）
反向PCR 普通PCR、原位PCR、反向PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR的 基本原理和操作步驟（三） 反向PCR(reverse PCR)是用反向的互補(bǔ)引物來擴(kuò)增兩引物以外的未知序列的片...
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逆轉(zhuǎn)錄過程的揭示是分子生物學(xué)研究中的重大發(fā)現(xiàn)，是對(duì)中心法則的重要修正和補(bǔ)充。人們通過體外模擬該過程，以樣本中提取的mRNA為模板，我們實(shí)驗(yàn)室用的BIOG Super Reverse Transcriptase效果尤為明顯，在逆轉(zhuǎn)錄酶（BIOG Super Reverse Transcriptase）的作用下，合成出互補(bǔ)的cDNA，構(gòu)建cDNA文庫，并從中篩選特異的目的基因。該方法已成為基因工程技術(shù)中最常用的獲得目的基因的策略之一。
反轉(zhuǎn)錄
rtPCR的關(guān)鍵步驟： ?反轉(zhuǎn)錄：將RNA反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA模板 ?變性：讓cDNA充分打開 ?退火：讓引物能結(jié)合到模板DNA上 ?延伸：讓 DNA 聚合酶（Taq 酶）開...
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MicroRNA確實(shí)不易提取，不過最近我們實(shí)驗(yàn)室新購入了一款biog提取游離RNA的試劑盒，提取純度比較高，而且操作簡單快捷，只要半個(gè)小時(shí)。
microRNA調(diào)控m6A RNA甲基化文獻(xiàn)解讀
m6A RNA Methylation Is Regulated by MicroRNAsandPromotes Reprogramming to Pluripotency ...
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DNA降解無非兩個(gè)原因：
1.細(xì)胞內(nèi)DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前沒有在細(xì)胞破碎的情況下放久吧？
2.機(jī)械力作用：有很劇烈的長時(shí)間渦旋嗎？或者之類的。但一般也不會(huì)有事。
我們實(shí)驗(yàn)室一般使用BIOG DNA Blood Isolate Kit提取全血樣本中的DNA,然后Qubit測(cè)提取到的DNA濃度CTAB法--DNA提取
實(shí)驗(yàn)步驟 1.稱取0.1g左右的植物組織，放入2ml離心管，加入600ul的DNA提取緩沖液（Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3）。2.研磨徹底...
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聽我?guī)熃阏f他們用BIOG CFDNA EASY KIT離心技術(shù)提取樣本血清中的microRNA,然后用Qubit 測(cè)濃度,我認(rèn)為樓主如果覺得提取到的microRN濃度不高可以用3倍體積的無水乙醇、0.1體積的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀進(jìn)行濃縮,或者可以用真空濃縮儀進(jìn)行濃縮
microRNA與血管通透性轉(zhuǎn)移研究套路
Cancer-secretedmiR-105destroysvascularendothelialbarrierstopromotemetastasis，if=27.407C...